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第三章细胞生物学研究方法 Methodology of Cell Biology Cells are (relatively) small and complex. How do we study them? 第三章细胞生物学研究方法 第一节显微技术 • 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜 • 三、显微操作技术 第二节细胞分离与细胞培养 第三节细胞及其组分的分析方法 第四节细胞生物学研究常用的模式生物 Development of Microscopes Observation Cytology Cell Biology Molecular cell Biology 第一节 显微技术 光学显微镜与电子显微镜 一、光学显微镜 普通复式光学显微镜 （light microscope） 相差显微镜 （phase-contrast microscope） （光程差或相位差转变为振幅差，相差板） 微分干涉显微镜 （differential-interference microscope） （厚度差转变为明暗差；增加样品反差，立体感强） 荧光显微镜 （fluorescence microscope） 激光共聚焦显微镜 （laser scanning confocal microscope） （一）普通光学显微镜 1. 构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 2. 原理：经物镜形成倒立 实像，经目镜放大成虚像。 • 3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的能力 光学显微镜的分辨力R=0.61λ/N ．A ． – 其中λ为入射光线波长； – N ．A ．为镜口率＝ｎsinα/2； – n=介质折射率； – α 镜口角（样品对物镜镜口的张角） 介质 空气 水 香柏油 α溴萘 折射率 1 1.33 1.515 1.66 光镜分辨力约为0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm The image of a fibroblast in culture obtained by four types of light microscopy bright-field microscopy phase-contrast microscopy Nomarski differential-interference -contrast microscopy dark-field microscopy （二）相差显微镜 • 把透过标本的可见光的光程或相位差变成振幅差，从而提高了 各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。 • 在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。 波长和振幅 相位差 发生变化 发生变化 振幅差 原理 环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与 聚光器之间。 相位板 （phase plate）： 物镜中加了涂有氟化镁的 相位板，可将直射光或衍 射光的相位推迟1/4λ。 • 用途：观察未经染色的标本 （三）微分干涉显微镜Differential interference contrast microscope （DIC ） • 1952年Nomarski发明，利 用两组平面偏振光的干涉， 加强影像的明暗效果，能显