重组DNA生物化学.pptVIP

* * * 1、启动子：建立表达载体时，选择强启动子。 2、基因剂量： 3、核糖体结合位点： SD顺序与16S rRNA 3’末端互补程度。 AUG—SD间距离。 AUG后的核苷酸（密码子偏爱） 影响外源基因在原核细胞中表达效率的因素 重组DNA技术与医学的关系 1. 疾病基因的发现与克隆 2. 生物制药 3. 基因诊断 4. 基因治疗 5. 遗传病的预防 生产蛋白质和多肽类活性物质 产品名称 治疗功能与医药范围 1. 人胰岛素 治疗糖尿病 2. 人生长激素 治疗侏儒症，加速创口愈合 3. α干扰素 治疗癌症、病毒感染 4. β干扰素 治疗带状疱疹，眼结、角膜炎 5. γ干扰素 治疗癌症、病毒感染 6. 人组织纤溶酶原激活因子(tPA) 溶解血栓，治疗急性心肌梗塞 7. 红细胞生成素 (Epo) 治疗肾病性贫血，增加红细胞及血色素水平 8. 超氧化物歧化酶 清除超氧化物，治疗关节炎，缓解心肌坏死 9. 凝血因子Ⅷ 治疗A型血友病 10. 乙型肝炎疫苗 防治肝炎 11. 神经生长因子 维持神经元细胞存活、生长和分化 12. 脑啡肤 镇痛 13. 降钙素 治疗骨质疏松症 胰岛素 人生长激素 干扰素 白细胞介素2 粒细胞集落刺激因子 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 红细胞生成素 EPO 组织纤溶酶原激活剂 生长激素 促生长素 抗血友病因子Ⅷ 脱氧核糖核酸酶 葡糖脑苷脂酶 鼠单克隆抗体 某些DNA顺序改变导致产生限制性片段长度多态性(RFLP) 利用RFLP确定罪犯 Restriction Fragment Length Polymorphisms 利用病毒载体进行基因治疗 用DNA芯片、SAGE等技术研究基因表达谱 Serial Analysis of Gene Expression SAGE由 Velculescu 于 1995 年首先提出，并逐渐发展成为一种以测序为基础，用于全基因组表达频谱分析和寻找差异基因的新技术。 SAGE技术是以转录子(cDNA)上特定区域 9-11 bp 的寡核苷酸序列作为标签(tag)来特异性地确定mRNA转录物，然后通过连接酶将多个标签(20-60个)随机串联形成大量的多联体(concatemer)并克隆到载体中，对每个克隆进行测序。 SAGE操作流程示意图 分离SAGE标记 将标记进行连接 将标记连接物进行测序 分析标记序列,确定基因表达谱 正常组织基因表达谱 病理组织基因表达谱 表达频率 表达频率 转基因植物已经占据了美国70％的作物 第一个转基因鼠 携带了生长激素基因的转基因鼠 利用大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、乳腺等生物反应器生产的药用蛋白质 生物技术即将改变 我们人类本身 关于期末考试 时间：2011年1月14日（周五）下午1：00-3：00 地点：3306、3308 题型：是非题、填空题、名词解释（英文）、综合题（简答、计算、分析、综合） 答疑：wrwang@fudan.edu.cn 1月13日下午、1月14日上午，立人生物楼114 * * * * * * * * * * * * * * * * 5、人工合成较短的DNA 6、差异显示法(differential display, DD)—筛选差异表达的基因 外源基因与载体的连接 1、粘性末端连接： 1）全同源粘末端连接 最方便简单 高背景-载体自身环化 双向插入 2）定向克隆：使外源基因定向插入到载体中的克隆策略 粘-粘连接：最有效、最快捷 粘-平连接：适用于外源基因仅与载体有一个相同酶切位点，可将另一末端补平。 2、平端连接 适用于：限制性内切酶切割产生的平端、 粘端补齐或切平形成的平端。 效率低，酶用量大。 3、同聚物加尾连接 由末端转移酶作用下，在DN