动物细胞培养组织培养.PPTVIP

动物的克隆 “动物的细胞和组织培养” 是动物克隆的技术基础 “细胞培养”也是细胞生物学的主要技术基础。 将动物体内的一部分组织取出 分散成单个细胞 人工控制的培养条件下 细胞得以生存并保持生命活动现象 生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等 机械消化、胰酶消化 （一）定义： P28 一、动物细胞的培养 原理：细胞增殖 ①无菌、无毒 （消毒、灭菌 ；可添加抗生素；定期更换培养液，清除代谢废物 ） ②营养： （液体培养基：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等） ③温度和pH ：（36.5±0.5℃，pH7.2~7.4 弱碱性） ④气体环境：O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） （二）操作流程及过程解读： 离体的动物细胞如何才能保证其正常的生命活动？需要哪些条件？ 1、培养条件： CO2培养箱,维持培养的PH值 可以补充合成培养基中缺乏的物质 动物体内一部分组织 分散成单个细胞 机械消化 或 胰蛋白酶酶解 原代培养 传代培养 细胞悬浮液 细胞株或细胞系 动物培养液 细胞形成生长晕并增大 取样 剪碎 分装 含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。 2、过程：（P29图） 应选择幼龄动物组织或胚胎 使细胞与外界充分接触；与外界物质交换更迅速高效； 取动物胚胎或幼龄动物器官和组织 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 机械消化：剪碎组织 胰蛋白酶酶解消化 分散成单个细胞，制成细胞悬浮液 2、过程：（P29图） 消化分解动物组织间的胶原蛋白和其他成分，获取单个细胞 转入培养液中进行原代培养 分瓶进行传代培养 贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理使其从瓶壁上脱落下来，分散成单个细胞，制成细胞悬液 特点：贴壁生长、接触抑制 接触抑制 细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白,也叫做糖被,他在细胞上起识别作用。当细胞增殖到一定程度,也就是互相挨在一起的时候,糖蛋白识别了这种信息,就会使细胞停止继续繁殖,这种现象就叫做接触抑制。 原代培养 ………… 细胞系（可传代） 原代培养物在首次 传代时就成为细胞系 连续 细胞系 有限 细胞系 可连续传代 传代培养 细胞株（具特殊性质） 连续细胞株 有限细胞株 挑选 细胞系：泛指可以传代的细胞； 细胞株：具有特殊性质的细胞系 不可连续传代 原代培养：即直接从体内取出细胞、组织和器官立即进行培养；没有分瓶培养之前的细胞培养。 传代培养：将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中（分瓶），使其继续生长、增殖。即称为传代培养。 强调几个概念： 细胞系: （2）连续细胞系: （1）有限细胞系： 连续细胞株：连续多次 有限细胞株：次数有限 细胞株: 泛指可传代的细胞 不能连续培养下去的细胞系 能连续培养下去的细胞系、认为其发生了转化：遗传物质发生了改变 大多数具有异倍体核型；有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性，不保留接触抑制，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌） 例：二倍体细胞 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞 具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性。 强调几个概念： （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰 素、单克隆抗体等。 （3）用于检测有毒物质。 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 通过细胞培养检测有毒物质 动物细胞培养的应用： 如何获得纯系的细胞系？ “克隆培养法”或“细胞克隆 ” 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。 概念： 产物具备怎样的特点？ 遗传性状均一、表现的性状相似，称为纯系 一个细胞 克隆培养法（细胞克隆） 纯系 适合于克隆的细胞： （原因？） 无限细胞系、转化细胞系、肿瘤细胞 对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞 怎样保证是纯系？ 基本要求：必须保证所建成的克隆来源于“单个细胞”。 原代培养细胞、有限细胞系 如何提高细胞克隆的形成率？ 选择适宜的培养基 添加血清 以滋养细胞支持生长 激素刺激（如胰岛素） 使用CO2培养箱，调节pH (胎牛血清最好，可以补充合成培养基中缺乏的物质) 维持培养的pH值 促进对糖的利用 液体培养基 失去增殖能力的小鼠成纤维细胞 成纤维细胞：是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的中胚层的间充质细胞分化而来。胞体多突起，呈星状，细胞质丰富、核较大 ①从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。例如研究缺少某种特殊蛋白的细胞，可以发现正常细胞中这种蛋白的功能。 ②作为