基因工程的基本操作步骤课件.pptVIP

③过程： 1、将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上 2、将重组Ti质粒导入农杆菌 3、用农杆菌感染植物体细胞 （2）基因枪法 适用于 单子叶植物 （3）花粉管通道法 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 取卵 显微注射 受精卵 早期胚胎培养 胚胎移植 * * * * * * 基因工程的基本操作步骤 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 也有一些具有调控作用的因子 2、获取目的基因的方法 （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 ________________________________________ (一)从基因文库中获取目的基因 1.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 2.基因文库的分类: 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库 基因文库的构建过程 限制酶 拼接到载体上 导入受体细胞扩增 通过对受体菌群体的培养而储存一种生物的全部基因。 基因组文库 3.基因文库的构建方法 提取生物某发育时期的mRNA 单 链DNA 逆转录酶 DNA聚合酶 双链CDNA (只含该生物部分基因) 与载体连接导入到受体菌群储存 cDNA文库 基因组文库和cDNA文库比较 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有终止子 启动子 真核细胞的基因结构（补充内容） 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 真核生物mRNA的形成 编码区 非编码区 RNA聚合酶结合位点 非编码区 转录 加工（剪切、拼接） 成熟mRNA 只对应外显子部分 初级转录物 基因组文库和cDNA文库比较 依据：目的基因的有关信息 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性 4.从基因文库中得到目的基因的方法 ①概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ 、__________ ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 DNA引物 热稳定DNA聚合酶 （二）利用PCR扩增目的基因 ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果：_______________________________________________________ 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内大量扩增 ⑥过程 a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 ⑦前提__________________________________________________ 有一段已知目的基因的核苷酸序列 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成（DNA合成仪） （三）人工合成 若基因_____，核苷酸序列______ ，可用此法。 较小 已知 （化学合成法） mRNA cDNA单链 cDNA分子 逆转录酶 DNA聚合酶 （三）人工合成 （反转录法）