维生素C对缺血再灌注的保护作用.docVIP

维生素 C对心肌缺血-再灌注的保护作用 实验目的 学会建立心肌缺血-再灌注动物模型 掌握维生素C对心肌缺血-再灌注保护作用的机制 比较维生素C在心肌缺血-再灌注不同时期时保护作用的效果 实验原理与设计 原理：1.有时缺血后再灌注，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。这种在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重，甚至发生不可逆性损伤的现象称为心肌缺血-再灌注损伤。 2．自由基的作用是其形成的重要机理之一。如何抑制自由基的作用及生成是研究各防治缺血-再灌注损伤作用药物的重点。缺血-再灌注时氧自由基生成增多，表现为黄嘌呤氧化酶形成增多、中性粒细胞的呼吸爆发、线粒体功能受损、儿茶酚胺自身氧化增加。由于自由基有极为活泼的反应性，所以它们能和各种细胞成分（膜磷脂、蛋白、核酸）发生反应，使多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜?以及引起蛋白质和DNA分子结构的变化?。自由基反应既可经自由基中间代谢产物不断向前发展，又可由细胞损伤而终止。自由基反应的扩展可以是无限的，即不断扩展生成新的自由基，形成连锁反应；但又可为各种自由基清除剂所终止。 3．维生素C是正常机体自由基清除剂，其抗氧化性有直接抗自由基作用，通过还原作用消除有害氧自由基的毒性。 设计：建立心肌缺血-再灌注动物模型，分别给予不给药，在缺血前、缺血期、血灌期分别给药的不同处理方法，以探讨维生素C对心肌的保护作用。 实验方法与步骤（写明器材及试剂） 实验动物：家兔 实验器材及试剂：RM-6240B生物信号采集处理系统，哺乳类动物手术器械，压力换能器，针形电极，玻璃分针，注射器，兔手术台，兔绳，丝线，20%乌拉坦溶液，维生素C水溶液，生理盐水 方法与步骤： 1．取家兔4只，随机分为四组，分别标记为不给药组、缺血前给药组、缺血期给药组、血灌期给药组，称重，自耳缘静脉以20%乌拉坦溶液（5ml/kg）麻醉，然后固定于兔台上，颈部术野备皮。 2．插针形电极于家兔四肢皮下，将电极另一端连接至RM-6240B生物信号采集处理系统。 3．在冠状动脉左室支主干根部穿线备用，打结作为局部缺血，松结作为复灌。 4．各组先稳定5min，再局部缺血20min，复灌30min，其余按下表处理方法进行实验。 组别 处理方法 缺血前给药组 于缺血前5min静注维生素C（0.2g/kg） 缺血期给药组 于缺血10min后静注等量维生素C 血灌期给药组 于复灌10min后静注等量维生素C 不给药组 静注等量生理盐水 5记录各项处理时左室最大收缩压LVSPmax，左室内压上升及下降最大速度±dp/dtmax。分析讨论以得出结论。 实验结果 左室收缩末压、左室内压上升及下降最大速度（LVSPmax，±dp/dtmax） 组别 时期 缺血前给药组 缺血期给药组 血灌期给药组 不给药组 正常 缺血前5min 缺血10min后 缺血20min后 复灌10min后 复灌20min后 复灌30min后 结论、分析与讨论 结论：维生素C对缺血-再灌注有保护作用，且缺血前给药的效果优于其它时间给药。 分析与讨论： 缺血前给药的效果较优，推测这与药物到达作用部位需一定时间，药物在局部缺血区分布较慢有关。而且在复灌期由于多种损伤因子的累积，单纯的在一定程度上清除自由基对心肌起不到显著保护作用。 由于实验例数较少，受个体差异影响较大，不具有确切的统计学意义，欲得到确切的结果还需加大样本容量进一步实验研究。 家兔耐受性较其他实验动物要好些，做冠脉结扎相对容易方便，可不用呼吸机，且存活时间也较长。结扎冠脉应为根部的结扎效果较好，结扎后可看到结扎下面的心肌颜色变紫。 腺嘌呤氧化酶途径是再灌注时产生氧自由基的主要来源，已证实犬、大鼠心肌内此酶含量高，但人、兔心肌中含量很低甚至测不到，而清除自由基为本试验药物的保护机制，因此选择家兔为模型较为理想。 ± dp/dt与LVSP都是用于描述左室收缩功能的指标，当LVSP在较小范围内变动时其微分±dp/dt的变化显著，而其特异性却较LVSP低，故在本实验中将二者结合应用，可以更好地表现结果的客观性。