抗原抗体反应课件.pptVIP

抗原抗体反应; 第一节 抗原抗体反应的原理第二节 抗原抗体反应的特点第三节 影响抗原抗体反应的因素第四节 免疫学检测技术的类型;第一节 抗原抗体反应的原理;第一节 抗原抗体反应的原理;静电引力 （electrostatic forces） 范德华引力:作用最小 （van der Waals interactions） 氢键:最具特异性 （hydrogen bond ） 疏水作用力:作用最大 （hydrophobic interactions） ;l. 静电引力;2.范德华引力;3.氢键结合力;4.疏水作用力;;;; 抗体与抗原结合是可逆的反应，在平衡时其 亲和常数 K= 抗原抗体复合物浓度 游离抗原浓度×游离抗体浓度 K代表抗体结合抗原的亲和力。 K值大的抗体与抗原牢固结合，不易解离，称该抗体有高亲和力。 ;三、亲水胶体转化为疏水胶体; ;第二节 抗原抗体反应的特点;特异性：抗原与抗体结合反应的专一性;两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应;二、可逆性; Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反应，在最适比例时反应最明显； 这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(IgG)为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形成大的复合物，肉眼才可见。;格子学说;只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而抑制反应现象的出现，此所谓带现象； 前带现象：Ab过剩，Ag过少； 稀释Ab，凝集反应常见； 后带现象：Ag过剩，Ab过少； 稀释Ag、沉淀反应常见。;前带现象;前带(prezone)：抗体过量 后带(postzone)：抗原过量 等价带(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适 ;第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象 ;第三节 影响抗原抗体反应的因素;一、反应物自身因素;1、抗原 抗原的理化性状、抗原决定簇的数目和种类均可影响血清学反应结果 例如，可溶性抗原与相应抗体反应出现沉淀，而颗粒性抗原与相应抗体反应则出现凝集；单价抗原与抗体结合不出现可见反应；粗糙型细菌在生理盐水中易出现自凝；红细胞与IgG类抗体结合不出现直接凝集等。 ;抗体对反应的影响表现在以下三个方面: (1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物；马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物；家禽免疫血清不能结合哺乳动物的补体，并且在高盐浓度（8.5% NaCl）溶液中沉淀现象明显。单克隆抗体一般不适用于沉淀反应或凝集反应。 ;(2)特异性与亲和力:;（3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。 ; l.电解质 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。通常在血清学试验中，以8.5% NaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。;2.酸碱度 合适的pH是抗原抗体反应的必要条件之一。血清学试验一般以pH6-9为宜，超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质，导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时，接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸凝集，造成假象。 ;3.温度 抗原抗体反应一般在15-40℃范围内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物解离;温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反应需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。;4、作用时间; 此外，抗原抗体反应在液相中反应时，适当振荡与搅拌，也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。 ;电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 ;反应类型;反应类型;原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如果二者相应，则可在抗原、抗体两液接触界面形成白色的沉淀环; 原理