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不同来源的桑黄子实体醇提物中黄酮含量及生物活性的比较 摘要：用60%的乙醇对7种不同来源的桑黄子实体进 行提取，测定了醇提物中的黄酮含量并用HPLC分析其组份， 同时采用Alamar Blue法和化学发光法分别对醇提物进行了 体外抗肿瘤细胞及抗氧化活性的测定。结果表明，这7个样 品的组成成分相似，但含量有差异。各醇提物对体外肿瘤细 胞L1210都有抑制作用，对超氧自由基有较强的清除作用， 其中Sh2的抗肿瘤细胞和清除超氧自由基的能力明显高于人 工火木桑黄Shi,且优于或相当于野生桑黄。？？ 关键词：桑黄；？A黄酮；？人抗肿瘤；？A抗氧化?？ 文献标识码：S567.39; R285.5??A 桑黄，俗称桑黄菇、桑臣、桑耳等，是一种珍贵的大型 药用真菌［1］。桑黄作为药用真菌最早记载于《本草纲目》， 传统中医认为桑黄性甘、平，味苦、辛，归肝、膀胱经，用 于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、带下、闭经、脾虚泄泻等［2］。 现代药理学研究表明，桑黄在抗癌、增强免疫以及抗肝纤维 化等方面效果显著［3］。目前对桑黄的研究较多集中在深层发 酵条件优化⑷、多糖分子结构［5, 6］、生物活性［7］等方面， 而对桑黄黄酮的研究较少，本文以不同来源的桑黄子实体为 材料，对其黄酮的含量、体外肿瘤细胞的抑制率及清除超氧 自由基的活性进行了比较，旨在为进一步开发和利用桑黄奠 定基础。?? 1材料与方法 □□人工代料栽培火木桑黄（Phellinus igniarius）购于黑龙江 □□ 省尚志市黑龙江绿源公司（Shi）；人工锻木栽培鲍氏桑黄 （Phellinus baumii）购于安徽金寨（Sh2）； Sh3-Sh7均为野生 桑黄，其中Sh3采自安徽金寨；Sh4 （寄生于松树）和Sh5 （寄生于桦树）采自河南泌阳；Sh6 （寄生于松树）和Sh7 （寄生于杨树）采自四川成都。?? 1.2? k 约? 芦丁标准品由中国药品生物制品鉴定所提供；鲁米诺 （luminal, 3-氨基邻苯二甲酰月井）为Sigma公司产品；甲醇 （色谱纯）为Sk Chemicals公司产品；超纯水（Vivendi Water Systems Ltd）自制；其余试剂均为国产分析纯。L1210小鼠 淋巴白血病细胞来自 ATCC（American Type Culture Collection）, 由上海市农科院天然药用资源研究与开发中心传代。细胞培 养用试剂为Gibco公司产品。?? 1.3?屮椒？ 1.3.1? T继崙铜闹票？ 将桑黄子实体置50?55 °C烘至八成干，然后剪成小块, 再于60 °C烘24 h后粉碎。准确称取5 g桑黄子实体干粉， 用60%的乙醇按料液比1 ： 25、室温下超声提取2.0 h,过滤， 残渣重复上述操作，共提取3次，合并滤液，45 °C减压旋 转蒸干，备用。?? 132?巾苜仆?含量的测定 以芦丁为标准品，采用NaNO2-AI(NO3)3比色法测定总 黄酮含量⑻。？？ 粗提物得率(％)=醇提物质量/原料质量x 100%?? 粗提物总黄酮含量(％)=样品黄酮质量数X样品稀释倍 数/粗提物质量x 100%?? 1.3.3? i ；拼继崙铜母卩丝6合卩益?谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)分析 将桑黄子实体乙醇提取物用甲醇配制成50 mg/mL溶液, 取 1.5 mL 置于 2 mL Eppendorf 管,于 9246Xg 离心 5 min, 取上清液用Waters高效液相色谱系统(2695 HPLC Pump, In-line Degasser, 2487 Dual 入 Absorbance Detector)进行 HPLC 分析，色谱柱为 C??18 柱(YMC-pack ODS AQ, 4.6 mm X 250 mm, ??5 u m)；进样量：10 u L；流速：0.5 mL/min, 流动相:A为甲醇，B为l%HAc-H2O,梯度洗脱，柱温：37 °C, 紫外检测波长280 nm,运行时间65 min。?? 1.3.4? i ；拼继崙错逋饪7L121O肿瘤细胞活性的测定 郝瑞霞，等：不同来源的桑黄子实体醇提物中黄酮含量 及生物活性的比较 取对数生长期的L1210肿瘤细胞于??129Xg离心3 min, 去除上清液，用RPMI1640完全培养基稀释至10??4个/mL。 取199 PL细胞悬液接于96孔板中，然后分别加入1 UL 浓度为10 Pg/mL 20 Ug/mL和40 Ug/mL的桑黄子实体 醇提物样品溶液（样品用二甲基亚砚溶解），以5 Ug/mL的 5-氟尿喀唏（5-Fu）作为阳性对照，1 UL二甲基亚砚为阴性对 照，每个样品重复3孔，于5%CO2, 37 ￡细胞培养箱中培 养72 h后，分