第10章 酶促反应动力学.pptVIP

茶学与生物系 张 剑 内容：研究酶促反应的速度以及影响酶促反应速度的各种因素包括底物浓度、酶浓度、pH、温度、激活剂与抑制剂等。 意义： 1）酶的结构和功能的关系研究 2）酶的作用机理的研究中 3）为了解酶在代谢中的作用 4）酶在某些药物中的作用机理等 主要内容 一、化学动力学基础 化学热力学 反应进行的方向、可能性和限度 化学动力学 反应进行的速率和反应机制 一、化学动力学基础 O2和H2合成水的反应 热力学上是可能的（-237.35kJ）,但在室温下这个反应的速率却慢到不可察觉的程度。 NO2聚合成N2O4 热力学上也是可能的（-5.4kJ）,实际上其反应速率却是快得无法测量。 一、化学动力学基础 化学计量方程 基元反应 反应物分子在碰撞中一步直接转化成产物分子的反应。 一、化学动力学基础 反应速率——以单位时间内反应物或生成物浓度的改变来表示。 (可逆反应——净速率——υ0) 反应速率方程 反应速率与反应物浓度之间的数学表达式。 一、化学动力学基础 反应分子数——基元反应中同时参与相互碰撞并形成过渡态复合体的分子数。 分子数都是正整数，它涉及的是反应机制问题。 一、化学动力学基础 一、化学动力学基础 一、化学动力学基础 一、化学动力学基础 a.当[S]很小时,V=Vmax [S]/KM 一级反应 无机离子： 主要是金属离子，它们有的本身就是酶的辅助因子，有的是酶的辅助因子的必要成分。 如: 激酶需要Mg2+激活 唾液淀粉酶需要Cl-激活 醛缩酶需要Mn2+激活 ★ 激活剂是相对的，具有一定的选择作用； ★ 不同离子之间有拮抗作用和可替代作用，如：Na+与K+、Mg2+与Ca2+之间常常拮抗，但Mg2+与Mn2+常可替代； ★ 激活剂的浓度要适中，过高往往有抑制作用 ★ 作用机制是多样的。 a.在化学结构上与被抑制酶的底物分子或底物的过渡状态相似。 b.能够与酶以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 1. 药物作用机理和抑制剂型药物的设计与开发； 2.了解生物体的代谢途径，进行人为调控代谢或控制发酵； 3.通过抑制剂试验研究酶活性中心的构象及其化学功能基团，不仅可以设计药物，而且也是酶工程和化学修饰酶、酶工业的基础。 抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。 不可逆抑制剂不能用透析或超滤等方法去除抑制剂而使酶复活。 如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。可使-OH磷酯化，所以它是活性中心有Ser残基的酶的抑制剂。 常见的有机磷农药，如敌敌畏、敌百虫，它们杀灭昆虫的机理就在于可抑制乙酰胆碱酯酶的活性，该酶的作用是将神经递质乙酰胆碱水解，若它被抑制，会导致乙酰胆碱的积累，使神经过度兴奋，引起昆虫的神经系统功能失调而中毒致死。 竞争性抑制作用 某些抑制剂结合在酶活性中心以外的部位，因而与底物和酶的结合无竞争，但酶分子上有了抑制剂后其催化功能基团的性质发生改变，从而降低了酶活性。这种作用称为非竞争性抑制作用。 非竞争性抑制作用 实例: 重金属离子：Cu2+、Hg2+、Ag+、Pb2+(—SH) 金属络合剂：EDTA、F-、CN-、N3- 3. kcat/KM的意义： V= kcat[Et][S] Km + [S] （三）动力学参数的意义 当[S] Km时，[E]＝[Et] 是E和S反应形成产物的表观二级速率常数。 其大小可用于比较酶的催化效率。 基本原则：将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km和Vmax。 （四）KM和Vmax的求取 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 例（1）双倒数作图法（Lineweaver-Burk法） 米氏方程的双倒数形式： 1/Vmax 斜率=Km/Vmax -1/Km （四）KM和Vmax的求取 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 （2）Eadie-Hofstee作图法 （四）KM和Vmax的求取 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 斜率=Km （五）多底物的酶促反应 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 1.酶促反应按底物分子数分类： 分为单底物、双底物和三底物反应 2.多底物反应按动力学机制分类： （1）序列或单置换反应 （2）乒乓或双置换反应 三元复合体 （五）多底物的酶促反应 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 (1)有序反应（ordered reactions） 1. 序列反应或单