ATF6UPR通路对喉癌患者化大疗失败的机制研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 温州医科大学硕士学位论文眦 温州医科大学硕士学位论文 眦Y 3 蛐1 呲哪¨m●I Ⅲ9 m8 ¨¨U●1 m8 目 录 目录 ．1 缩词简表 ．2 中文摘要 一3 英文摘要 ．5 前。言 ．7 材料方法 ．9 结果 1 3 分析与讨论 1 8 参考文献 2l 致谢 ．．23 综述 ．．24 参考文献 35 独创性声明 ．．46 万方数据 温州医科大学硕士学位论文缩词简表 温州医科大学硕士学位论文 缩词简表 缩写 英文全称 中文全称 HEP一2 human epidermoid cell 人喉表皮样癌细胞 UPR unfolded protein response 未折叠蛋白质应答 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PBS phosphate belanced solution 磷酸缓冲液 EDTA Ethylenediaminotetraacetic acid 乙二胺四乙酸 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 SDS—PAGE Sodium dodecyl sulfate——polyacrylamide gel 十二烷基硫酸钠聚丙 el ectrophores i 烯酰胺凝胶电泳 ERS endoplasmic reticulum stress 内质网应激 FCM flow cytometry 流式细胞术 CHOP DNA damage—inducible gene 153 DNA损伤诱导基因 或C／EBP同源蛋白 XBP一1 X—box binding proteins一1 X-box结合蛋白 ATF4 activating transcription factor 4 激活转录因子4 MTT 3一(4，5一Dimethylthiazol一2一y1)一2， 噻唑蓝 5一diphenyl—tetrazol ium bromide 2 万方数据 温州医科大学硕士学位论文ATF6-UPR 温州医科大学硕士学位论文 ATF6-UPR通路对喉癌患者化疗失败的机制研究 目的： 探讨ATF6-UPR通路在喉鳞状细胞癌患者接受化疗过程中的表达变化，以及这种 变化对喉癌患者对化疗药物产生耐药性及复发的影响及机制。 方法： 1．选择性收集临床上喉癌患者标本，并将其分为原发肿瘤组，单纯手术后复发肿 瘤组，手术后接受化学治疗后复发肿瘤组以及阴性对照组，采用免疫荧光组织化 学染色技术对收集到的临床标本进行染色，观察在不同阶段下的肿瘤组织内UPR 通路上游分子ATF6及AKT-mTOR通路相关分子的表达情况，从分子水平证明UPR 通路的过度激活对肿瘤耐药及复发的影响。2．在细胞层面上，应用相关药物引起 细胞内UPR通路的变化，并用WESTERN-BLOT实验来进行定量分析。 3．利用细胞增殖抑制试验，细胞凋亡检测实验、细胞周期检测实验及 WESTERN-BLOT等实验，来观察ATF6-UPR通路表达变化对其他相关通路如 AKT-mTOR通路的影响，并导致的细胞相关特性及对化疗药物敏感性变化。 4．分别利用ATF6-UPR通路及AKT／mTOR通路相关抑制剂抑制其表达，在利用 WESTERN-BLOT实验来观察两条通路之间可能存在的关系。 结果： 1．取得喉鳞状细胞癌石蜡组织标本共20例，包括原发肿瘤组织，单纯手术后复 发肿瘤组织，手术后接受化学治疗后复发的肿瘤组织以及正常喉粘膜上皮各5 例。肿瘤组织进行相关指标免疫荧光组织化学染色，观察可见ATF6一UPR通路、 AKT-mTOR通路相关分子在手术后接受化学治疗后复发组普遍高表达。 2．应用姜黄素可显著引起喉癌细胞系HEP一2内ATF6一UPR通路的激活。 3．利用姜黄素引起ATF6-UPR通路激活后，AKT—mTOR通路也出现激活，两者之间 存在时间差异性，且细胞的增殖抑制，凋亡出现的时间与前两者亦存在时间差 异性。 4．分别抑制ATF6一UPR通路或AKT-m