ANXA5表达调控人肝癌HepG2细胞侵袭 似转移及顺铂耐药性的作用及机制研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 目 录 一、摘要 l (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 ．3 二、正文 ．6 前言 ．．6 第一部分：ANXA5表达稳定下调的HepG2细胞株的构建 (一)材料和方法 8 (二)结果 ．13 (三)讨论 ．14 (四)结论 ．15 第二部分：ANXA5表达下调对HepG2细胞侵袭、转移和顺铂耐药性 的作用及机制的研究 (一)材料和方法 ．16 (二)结果 ．23 (三)讨论 ．．31 (四)结论 ．34 参考文献 ．．34 三、综述 ．．37 (一)综述 ．．37 (二)参考文献 ．41 四、致谢 ．．44 万方数据 大连医科大学硕士学位论文ANXA5 大连医科大学硕士学位论文 ANXA5表达调控人肝癌HepG2细胞侵袭、转移 及顺铂耐药性的作用及机制研究 硕士生姓名：陈晨 指导教师：孙明忠教授 指导小组：刘淑清教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘要 背景：膜联蛋白A5(Annexin A5，ANXA5)，在多种组织中普遍表达。ANXA5 异常表达与多种恶性肿瘤相关；与原位肝癌组织相比，ANXA5在肝门静脉瘤栓中 高表达：在顺铂耐受的鼻咽癌细胞中也呈高表达。本课题组前期研究表明，ANXA5 表达水平影响小鼠肝癌细胞(Hca．F／Hca．P)的增殖、迁移、侵袭等生物学功能， 具有促进作用。本论文研究ANXA5影响人HepG2生物学行为及机制研究。 目的：l、构建pGPU6／GFP／Neo．shRNA-ANXA5表达载体，利用脂质体稳定转染 至HepG2中，筛选ANXA5表达稳定下调单克隆细胞株及对照细胞株；2、研究 ANXA5对HepG2体外增殖、迁移、侵袭、粘附、细胞骨架形成的影响及作用的 分子机制；3、探究ANXA5对HepG2细胞cisplatin耐受性的影响。 方法：1、根据人源ANXA5的mRNA序列，设计特异性siRNA及无关序列，构 建pGPU6／GFP／Neo．shRNA．ANXA5腻C表达载体；2、利用LipofectaminelM 2000 转染试剂转染重组质粒至HepG2中，G41 8筛选及Western Blot验证获得ANXA5 表达稳定下调单克隆细胞株及对照细胞株：3、MTT法联合平板克隆形成实验探究 ANXA5对HepG2体外增殖能力影响；4、Transwell小室法结合划痕实验探究 ANXA5对HepG2体外迁移、侵袭能力影响；5、与细胞外基质、内皮细胞以及小 鼠淋巴结粘附实验探究ANXA5对HepG2粘附能力影响；6、对微丝进行染色，探 究ANXA5对HepG2细胞骨架影响：7、MTT法结合Hoechst 33342染色法检测 ANXA5对HepG2 J11页铂(cisplatin)耐受性影响；8、Weatem Blot检测ERK信号 通路关键分子、c．Myc表达变化；9、qRT．PCR检测E-Cadherin表达水平变化。 结果：l、构建了pGPU6／GFP／Neo．shRNA．ANXA5／NC表达载体，获得ANxA5表 万方数据 大连医科大学硕士学位论文达稳定下调单克隆 大连医科大学硕士学位论文 达稳定下调单克隆HepG2．shANXA5及阴性对照HepG2．shNC细胞株。与 HepG2．shNC相比，HepG2．shANXA5中ANXA5下调近100％；2、HepG2．shANXA5 较HepG2．shNC的增殖能力降低，平板克隆形成率降低24．7％；3、与HepG2．shNC 相比，HepG2．shANXA5迁移能力降低70．O％；4、HepG2．shANXA5较HepG2．shNC 侵袭能力降低85．0％；5、HepG2．shANXA5较HepG2．shNC对细胞外基质、内皮 细胞、小鼠淋巴结的粘附能力分别降低10．2％、30．2％、48．0％；6、ANXA5下调 后，HepG2细胞actin骨架染色变浅，F．actin结构性降低排列紊乱；7、 HepG2．shANXA5较HepG2．shNC对cisplatin敏感性明显降低；8、与HepG2．shNC 相比，HepG2．shANXA5中Raf、MEKl／2、ERK2的磷酸化水平降低，c．Myc蛋白 水平降低，E．Cadherin mRNA水平升高。 结论：1、筛选获得ANXA5表达稳定下调及对照单克隆细胞株；2、ANXA5下调 抑制了HepG2体外增殖能力；3、ANXA5下调抑制了HepG2体外迁移、侵袭、黏 附、细胞骨架形成能力；4、ANXA5下调可能通过ERK信号通路调控HepG2的 增殖、转移能力；5、ANXA5下调增强HepG2对cisplatin的耐受性。 关键词：ANXA5肝癌转移ERK信号通路耐药性 万方数据 大连医科大学硕士学位论文Study 大连医科大学硕士学位论文