AlphaCat朵enin缺失抑制肿瘤细胞中cellincell结构的形成.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 ＼呲帅㈣吣呲灿唧叭眦帆Y31 ＼呲帅㈣吣呲灿唧叭眦帆 Y31 1 7 1 04 硕士学位论文 一一一一 Alpha—Catenin缺失抑制肿瘤细胞中cell—in- cell结构的形成 硕士研究生：宁相凯 指导教师：马骊 摘要 背景 Cell．in．cell(简称CIC)现象，是指一个或多个细胞在另一个细胞胞质内， 且保持完整的细胞膜结构的现象，从发现至今已有100多年历史。对于它的认识 也经历了从一开始被认为仅仅是偶然事件，到如今承认它确实具有广泛的生物 学意义。在今天，越来越多的人投入到了CIC的研究中，对于CIC的认知更加 系统清晰，研究方法也日渐成熟。 目前，依据参与的细胞类型不同可以将CIC结构粗分为两类：同质的CIC 结构和异质的CIC结构。所谓同质的CIC结构，指形成CIC的细胞均为同种类 型的细胞，如上皮细胞与上皮细胞之间。这种现象往往出现在肿瘤细胞之间。异 质的CIC结构是指形成CIC的细胞来源于不同种类，如肿瘤细胞与免疫细胞之 间(如NK细胞、T细胞、B细胞)，免疫细胞钻入到肿瘤细胞内部，也被称作 “钻瘤”。 研究发现，CIC结构中内部细胞往往死亡，但死亡机制尚不完全明了，其中 部分是通过非凋亡途径，主要是由外侧细胞溶酶体参与的细胞死亡过程，构成一 种全新的死亡机制。就同质CIC而言，研究者将其命名为“entosis”，是指上皮来 源的细胞之间首先形成CIC结构，内部细胞被来源于外部细胞的细胞膜包裹， 万方数据 摘要呈囊泡状。然后外部细胞 摘要 呈囊泡状。然后外部细胞LC3于囊泡膜表面富集，并在ATG5、ATG7、VPS34 等分子作用下脂质化，招募靶细胞的溶酶体蛋白LAMPl和蛋白酶CathepsinB。 这些分子进入囊泡，对内部细胞产生溶酶体溶解作用，导致内部细胞死亡。 有报道称CIC的形成与机体形成免疫耐受有关。同时我们的研究表明CIC 结构的形成与肿瘤的发生发展有着密切关系。其重要性可见一斑。为了更近一步 了解CIC的生物学功能，我们有必要研究其形成的机制。而对于形成机制的研 究则应该遵循人的认知规律——在细节中认识整体，在整体中把握细节。只有细 节层面与整体层面有机统一，才能够充分地、客观地认知事物。 对于细节层面而言，需要落实在具体的基因或生物分子上。在之前的研究中 我们发现E．cadherin和P．cadherin的缺失，会明显抑制肿瘤细胞之间形成CIC结 构；而恢复E．cadherin和P．cadherin的表达，肿瘤细胞之间则会重新形成CIC结 构。众所周知，E．cadherin和P．cadherin都是细胞间相互黏附、连接的重要分子， 这向我们提示细胞问的黏附、连接似乎和CIC结构的形成有关。着眼于细胞间 黏附、连接的相关分子，我们将研究目标定位为c【．catenin，它位于细胞膜表面粘 附分子与细胞内F．actin之间，通过自身结构域将二者连接，从而形成稳定的细 胞间连接。 对于整体层面而言，需要建立、健全一个系统的认知体系。虽然人类对于cell． in．cell的研究已有100多年历史，但至今仍处于起步阶段。对于cell．in．cell结构 如何形成，研究者们更是众说纷纭：有人认为是被动发生的，不需要耗能；而有 人则认为是主动发生的，需要耗能；有人认为是内部细胞主导的“钻”的过程：有 人认为是外部细胞主导的“吞”的过程 造成这一现象的主要原因是实验数据 纷繁复杂，且规律难寻。因此，一个完整的、可靠的模型对后续研究尤为重要。 但我们并不奢望能够建立起一个对cell．in．cell结构形成过程完全正确、客观的模 型，因为基于目前的研究现状及技术制约，完全认识cell．in．cell还是天方夜谭。 但如果能建立一个相对完整的模型框架，并总结目前已有的研究成果，以此为基 础提出某些设想或推论，为之后的研究指明方向亦或是提供些须帮助，那么这样 的模型就有一定意义。 II 万方数据 硕士学位论文目的 硕士学位论文 目的 1．研究a．catenin对cell．in．cell结构形成的影响； 2．探讨0c．catenin影响cell．in．cell结构形成的作用机制； 3．综合已有数据初步建立cell．in．cell结构形成过程的模型。 方法 在之前的研究中我们发现：有些肿瘤细胞即便高表达E．cadherin、P．cadherin， 但CIC形成率却很低，而这些肿瘤细胞往往低表达0【．catenin。为了更进一步了 解Q．catenin与CIC的关系，我们首先构建携带0【．catenin基因的逆转录病毒质粒 pQCXIP．EGFP．0【．catenin质粒，包装病毒，并利用病毒将外源性c【．catenin基因转 入到不表达0【．catenin分子的肿瘤细胞中，得到能