Caveolin-1降低EGFR突变阳性志非小细胞肺癌对TKIs的敏感性.docxVIP

；．-J：ll：医科大学 ；．-J：ll：医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要 内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责 任。 研究生签名弘骘翩拂扭净二 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中 特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指 导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名：如瓷 导师签章： 丘年≥月力日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 5 英文缩写 10 研究论文Caveolin-1降低EGFR突变阳性非小细胞肺癌对TKI$的敏感性 前言刖舌 111。 材料与方法 12 结果 2l 附图 24 附表 30 讨论 33 结论 36 参考文献 37 综述非小细胞肺癌分子靶向治疗进展 ．41 致谢 53 个人简历 54 万方数据 中文摘要Caveolin。1降低EGFR突变阳性非小细胞肺癌对TK 中文摘要 Caveolin。1降低EGFR突变阳性非小细胞肺癌对TK l s的敏感性 摘 要 目的： 肺癌是癌症相关死亡的首要原因。其中非小细胞肺癌(non．small cell lung cancer，NSCLC)占80％左右，大多数NSCLC诊断时已经属于晚期， 5年生存率不足15％。以铂类为基础的两药联合方案是晚期NSCLC的标 准一线化疗方案，但是化疗有效率低、副作用大，近年来分子靶向治疗为 晚期NSCLC提供了新的选择。 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)属于具 有酪氨酸激酶活性的HER家族中的一员。HER家族包括四大成员：HERl or EGFR，HER2，HER3及HER4。EGFR与配体特异性结合，形成同源 或异源二聚体，导致EGFR胞内区自动磷酸化及酪氨酸激酶激活，引起下 游多条信号转导通路如Ras．Raf-MAPK、P13K．Akt等激活，促进肿瘤细胞 增殖、分化、迁移、侵袭等。目前发现，EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor，TⅪs)如吉非替尼、厄洛替尼等对带有EGFR基因敏感 突变包括19外显子缺失突变、21外显子(L858R)替代突变的晚期NSCLC 病人治疗有效，因此，EGFR-TKIs广泛用于晚期NSCLC的治疗，但大部 分初始治疗有效的病人最终会出现耐药，提示可能存在其它分子影响 EGFR信号通路，在NSCLC中发挥着重要作用。 小凹蛋白一1(caveolin-1，Cav．1)是细胞膜上Caveolae的重要组成蛋 白，相对分子量21．24KDa，包括178个氨基酸残基，C端残基与N端残 基游离，并且伸入胞质内，位于肽链中间的疏水性氨基酸残基(102．134) 形成发卡样结构，将Cav．1锚定在细胞膜上。N端氨基酸残基为Cav一1的 功能区，该区域与EGFR结合，从而参与肿瘤细胞增殖、粘附、迁移和信 号转导。因此，推测Cav．1的表达可影响NSCLC对EGFR-TKIs的敏感 性。 本研究利用带有EGFR敏感突变的NSCLC细胞株PC．9，通过：(1) 采用Westem blot验证Cav．1过表达的稳定转染细胞株。(2)采用MTS 比色分析法、划痕修复试验、Transwell法检测厄洛替尼对稳定转染细胞 万方数据 中文摘要株增殖、迁移及侵袭能力的影响；(3)采用Westem 中文摘要 株增殖、迁移及侵袭能力的影响；(3)采用Westem blot法，检测厄洛替 尼对EGFR及下游信号通路中各激酶活化水平的影响。旨在探讨Cav．1 的表达是否可影响NSCLC对EGFR-TKIs的敏感性。 方法： 1 Western bolt验证Cav．1过表达的稳定转染细胞株 利用Western bolt方法检测稳定转染细胞株中Cav．1蛋白水平。 2 MTS比色分析法检测厄洛替尼对稳定转染细胞增殖能力的影响 将PC．9／Cav．1及PC。9／pcDNA3．1细胞分别接种于96孔板，次日换用 含不同浓度厄洛替尼(0、0．005、0．01、0．02、o．04、0．08、0．16、0．32／amol／L) 的完全1640培养液继续培养48h，加入MTS溶液，通过测定各孔的吸光 度(OD)值，计算细胞生长抑制率和厄洛替尼的半数抑制浓度(IC50)。 3划痕修复实验检