BrMC对肝癌相关思巨噬细胞诱导SMMC7721细胞系干样细胞特性的影响.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 分类号学校代码 分类号 学校代码 !Q5生2 学号2Q13Q21皇!生2鱼 BrMC对肝癌相关巨噬细胞诱导 SMMC．772 1细胞系干样细胞特性的影响 Effects of 8-bromo．．7．．methoxychrysin on stem—like characteristics of SMMC一772 1 cell line induced by liver tumor—associated macrophage s 研究生姓名 孙妹雯 指导教师姓名、职称 萱蕉国整撞 学 科 专 业 生药堂 研 究 方 向 抗肿瘤药物蓥墨 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一六年五月 万方数据 IIII IIII I II I III III II II II IIl Y3085607 摘要 目的：研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8．bromo-7-methoxychrysin，BrMC)对肝癌相关巨 噬细胞极化表型以及肝癌相关巨噬细胞诱导人肝细胞癌SMMC．7721细胞系细胞 自我更新、干细胞标志物表达、迁移和侵袭等特性的影响，并探讨BrMC调节肝 癌相关巨噬细胞NF．r．B表达与其逆转肝癌相关巨噬细胞极化表型和抑制肝癌相 关巨噬细胞诱导SMMC．7721细胞系肝癌干样细胞特性之间的关联性。 方法：SMMC．7721细胞系第3代球形成细胞鉴定作为肝癌干样细J抱(1iver cancer stem．1ike cells，LCSLCs)模型，并收集LCSLCs条件培养基(LCSLC-CM)。以佛波 酯(Phorbol M[yristate Acetate，PMA)活化的体外培养人T肿一l单核细胞系细胞为 THP．1源性巨噬细胞，用LCSLC．CM处理的THP．1源性巨噬细胞作为肝癌相关 巨噬细胞或者在Ttranswell小室与LCSLCs共培养系统中活化THP．1源性巨噬 细胞为肝癌相关巨噬细胞。LPS与INF-Y处理THP-l源性巨噬细胞作为经典活化 M1型巨噬细胞对照。不同浓度BrMC(0、5、10、20 pmol／L)处理LCSLCs或 LCSLCs／THP．1源性巨噬细胞共培养系统观察药物干预效应。NF．r,B特异性抑制 剂SN50用于探讨BrMC药理作用机制。比较肿瘤球形成率测定细胞自我更新能 力，Western blot分析干细胞标志物CDl33和CD44蛋白的表达，划痕法和 Tmnswell小室侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力。细胞免疫荧光染色和 Westem．blot分析巨噬细胞表面标志蛋白CD68和M2型巨噬细胞即肝癌相关巨 噬细胞表面标志蛋白CDl63表达。ELISA测定肝癌相关巨噬细胞条件培养基细 胞因子几．10、IL．12、VEGF、MMP．9浓度；Griess法测定培养基NO水平。 结果：1．与亲本细胞相比，第3代人肝细胞癌SMMC．7721细胞系球形成细胞高 万方数据 表达CDl33 表达CDl33和CD44干细胞标志蛋白，更高肿瘤球形成率，具有肝癌干样细胞 特性。 2．LCSLC．CM或与肝癌干样细胞共培养能有效诱导体外培养THP-1源巨噬细胞 转分化为肝癌相关巨噬细胞。与M1型巨噬细胞相比，肝癌相关巨噬细胞高表达 CDl63蛋白：细胞分泌谱为Ⅲ．10“汹、几．1210w、VEGF Mgh、MMP．9 Mgh；且NO 释放减少，呈现出M2型巨噬细胞极化表型。 3．肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞／THP．1源巨噬细胞共培养条件 培养基有效诱导SMMC．7721细胞自我更新、干细胞标志蛋白表达、体外细胞迁 移和侵袭。 4．BrMC以浓度依赖方式降低肝癌相关巨噬细胞CDl63表达，逆转肝癌相关巨 噬细胞M2型巨噬细胞极化相关细胞因子分泌谱。 5．BrMC以浓度依赖方式抑制肝癌相关巨噬细胞条件培养基诱导SMMC．7721细 胞CDl33和CD44蛋白表达，肿瘤球形成和体外细胞迁移和侵袭作用(P0．05)。 6．特异性NF-r,B抑制剂SN50以浓度依赖方式降低肝癌相关巨噬细胞NF—r,B(p65) 蛋白表达水平妒0．05)；同时，SNS0与BrMC协同拮抗肝癌相关巨噬细胞条 件培养基或肝癌干样细胞厂rHP．1源巨噬细胞共培养条件培养基诱导SMMC．7721 细胞自我更新、干细胞标志蛋白表达、体外细胞迁移和侵袭作用。 结论：1．肝癌干样细胞条件培养基或肝癌干样细胞／THP-I源性巨噬细胞共培养 促成THP．1源性巨噬细胞M2型极化。 2．肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞／THP-1源性巨噬细胞共培养条 件培养基诱导SMMC．7721细胞系细胞自我更新、干细胞标志物表达、迁移与侵 袭等肝癌干样细胞特性。 Ⅱ 万方数