bFGF和TGF审审β1对人牙龈成纤维细胞生物学活关性的影响.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 天津医科大学 硕士学位论文 bFGF和TGF-β1对人牙龈成纤维细胞生物学活性的影响 姓名：梁妍 申请学位级别：硕士 专业：口腔医学；口腔临床医学 指导教师：王永兰 201105 天津医科人学硕+ 天津医科人学硕+学位论文 中文摘要 目的： 通过组织块法培养人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast，HGF)，观察 HGF体外培养的生物学特性，探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast factor,bFGF)和转化生长因子131(transfer growth factor-131，TGF-131)单独及联合应 用对HGF增殖、I型胶原(collagen I，Col I)及糖胺多糖(glycosaminoglyca，GAG) 分泌的影响，研究bFGF署ITGF．131单独及联合应用促进牙龈组织再生的作用。 方法： 1．采用组织块培养法进行人牙龈成纤维细胞的原代培养。2～6代细胞用于实验， 倒置相差显微镜下观察细胞形态。抗角蛋白染色及波形丝蛋白染色进行细胞 来源鉴定。 2．实验分组：根据实验过程中人牙龈成纤维细胞培养液成分的不同进行分组， 每组设8个复孔。(1)对照组：培养液为仅含5％FBS的DMEM；(2)bFGF 干预组：培养液中除含5％FBS的DMEM，还分别含有bFGF O．1ng／ml、lng／ml、 10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml；(3)TGF一131干预组：培养液中除含5％FBS的 DMEM，还分别含有TGF-131 O．1ng／ml、lng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng,／ml。 (4)bFGF联合TGF．131干预组：优选bFGF和TGF．131干预组中促细胞增殖 最佳浓度进行联合培养。 3．四甲基偶氮哗盐比色法(methyl thiazolyl terazolium，MTT)动态检测bFGF及 TGF．131对人牙龈成纤维细胞增殖活性的影响。酶联免疫吸附法 (enzyme．1inked immunosorbent assays，ELISA)及阿利新蓝法分别检测细胞增 殖活性最强时bFGF及TGF．131对HGF上清液中l型胶原及糖胺多糖含量的 影响。 结果： 1．采用组织块原代培养法成功培养出人牙龈成纤维细胞。倒置相差显微镜下观 察可见，组织块接种3～7d后即有细胞从其周围游出，细胞呈长梭形，并围 绕组织块呈放射状排列。传代后细胞生长迅速。经细胞来源鉴定，所培养细 胞呈现抗角蛋白染色阴性，抗波形丝蛋白染色阳性，证实所培养细胞为中胚 天津医科人学硕十学位论文层来源的成纤维细胞。 天津医科人学硕十学位论文 层来源的成纤维细胞。 2．MTT法动态检测结果显示，接种后第3天开始bFGF和TGF．Bl对HGF的增殖作 用均较对照组明显(PO．05)，在第5天时两种生长因子对细胞增殖的促进作用 最强。两种生长因子促HGF增殖的最佳浓度分别为10ng／ml及lng／ml，两者的 联合作用对细胞的增殖作用更明显(P0．05)。 3．ELISA法检测显示，一定浓度范围内(0．1ng／ml-100ng／m1)，bFGF对于HGF的 胶原合成具有抑制作用；而TGF。Dl对其则有明显的促进作用。两种生长因子 促细胞增殖最佳浓度联合应用时促进作用更明显(尸O．05)。 4．阿利新蓝法显示，一定浓度范围内(O．1ng／ml～100ng／m1)，bFGF及TGF-p1对于 人牙龈成纤维细胞的糖胺多糖合成均具有促进作用，两种生长因子促细胞增 殖最佳浓度联合应用时效果更明显(氏0．05)。 结论： 1．采用组织块原代培养法可成功培育出人牙龈成纤维细胞；细胞传代后，生长 旺盛，分裂较快，能够满足实验中所需的大量细胞。 2．bFGF和TGF．Dl在一定浓度范围内都能促进人牙龈成纤维细胞增殖及糖胺多 糖分泌，但最佳显效浓度不同；两种生长因子对于l型胶原的分泌分别具有抑 制和促进作用。 3．一定浓度的bFGF和TGF．131联合应用对于人牙龈成纤维细胞增殖及细胞外糖 胺多糖的分泌具有协同促进作用；对于I型胶原的分泌具有拮抗作用，促进作 用占优势。 关键词： 碱性成纤维细胞生长因子转化生长因子．131 牙龈成纤维细胞 I型胶原 糖胺多糖 天沣医科人学硕+ 天沣医科人学硕+学位论文 Abstract Obj ectives： To culture human gin西val fibroblasts with fis册explant method and watch their biological characterization in vitro；investigate the influence of bFGF and T