BHIV 贺cDNA的构建及其生物学活性研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 南开大学博士学位论文 南开大学博士学位论文 摘要 摘要 ／ f牛免疫缺陷病毒(bovine immunodeficiency virus，BIV)在分类上与HIV同 属于反转录病毒科的慢病毒属，H1V是导致人类艾滋病的病原，BIV感染后一般 不引起牛的免疫缺陷病，也很难在人细胞中建立感染。～种同时具有HIV免疫 原性和BIV低致病性的重组病毒BHIV很可能成为理想的AIDS减毒活疫苗，但 HIV和B1V的同源性较低，要经过多种探索方能得到可在人源细胞中复制的 BHIV重组病毒，确定HIV和BIV各基因能否相互置换以及能在多大程度上互 换是构建具有感染性BHIV重组病毒的前提。厂’ 本文用DNA重组技术分别置换HIV和BIV的相应基因，构建出3种以HIV 为主体的BHIV cDNA和1种以BIV为主体的BHIV cDNA，将这些重组病毒 cDNA转染MT．4细胞，通过RT．PCR方法分析病毒早期基因和晚期基因的转录 和剪接，间接免疫荧光试验检测病毒外壳蛋白和包膜蛋白基因的表达，反转录酶 活性测定推测表达产物的加工，电镜或同位素标记试验观察病毒颗粒的产生，转 染细胞传代培养确定重组病毒的复制能力。结果显示，以HIV为主体的重组病 毒和以BIV为主体的重组病毒在MT．4细胞中的活性存在显著差异。深入分析 BIV和BHIV cDNA各基因在MT一4细胞的表达情况。f所得结果如下： 1．BIV虽然不能在MT．4细胞中复制，但可以进行转录、转录后加工、翻译和 翻译后加工，表达出有活性的反转录酶。与HIV相比，BIV基因在人源细胞中 的转录和翻译水平较低。 2． 以HIV为主体，嵌合了BIV gag-pol基因的BHIV-l eDNA转染MT一4细胞 后有早期基因和晚期基因的表达，能检测出反转录酶活性，表明BIV的结构基 因gag-pol能在HIV的启动子和调节基因的调控下进行表达，同时也说明BIV 的蛋白酶可以在人源细胞中发挥功能，对BIV的Gag—Pol前体进行加工。 3． 以HIV为主体，嵌合了BIV的基质蛋白MA、p2L、外壳蛋白CA和p3间 隔肽编码区的BHIV．G2 cDNA转染细胞后有早期基因和晚期基因的表达，并能 装配出病毒颗粒；以HIV为主体，嵌合了BIV的基质蛋白MA、p2L、外壳蛋白 CA编码区的BHIV．G1也有早期基因和晚期基因的表达，但不能装配出病毒颗 粒。说明HIV的间隔肽p2和BIV的间隔肽p3对病毒颗粒的形成至关重要，二 者在功能上不能相互替代。 4． 以BIV为主体，嵌合了HIV env基因的BHIV．2 cDNA转染MT一4细胞后能 检测到晚期基因gag的表达，但检测不到反转录酶活性。根据其基因组的结构特 点，可以推测BIV的f讲外显子1和HIV的tat外显子2可以进行拼接，融合的 Tat蛋白与BIV的TAR相互作用后能够促进BIV LTR起始的转录；BIV的rev 外显子1和HIV的旭v外显子2可以进行拼接，融合的Rev蛋白能够与HIV的 因可以在～定程度上相互置换，有希望构 篓嚣亨H人I鬻V关键词： ； B胞IV够；BH制IV的呈嚣鬃cD病N％Ai构建；转染；活性分影基因表∥重组病毒 构建；转染；活性分析；基凼表达 壹墅查兰竖主堂垡鲨苎 壹墅查兰竖主堂垡鲨苎 塑茎 Abstract Bovine immunodeficiency virus(BIV)and human immunodeflciency virus(HIVl are both members of the genus Lentivirus，family Retroviridae．mV is the etiologic agent of A1DS． while BIV does not cause apparent clinical symptom after infecting cattle．A kind of BHIv chimeras possessing the merits of the nonp