Bhlhb5 SoxE与Necl1在神经发育和分始化中的作用.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 盟± 盟±学位论文原创性、真实性声明 本人郑重声明：此处所提交的博士学位论文g垦鱼H也§：墨Q缒墨M吐!在控 经蕴直塑盆丝主数佳旦≥，是本人在导师指导下，在中国协和医科大学基础医学 院生物化学与分子生物学系攻读盟±学位期间进行研究工作所取得的成果。据本 人所知，论文中除已注明及致谢的部分外不包含他人已发表或撰写过的研究成 果；对本文的研究工作作出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明或 致谢。本人对论文中所有实验数据和结果的真实性负责。 研究生签名剐鸯 日期 2007年岁月，珀 监± 监±学位论文及论文相关实验材料使用授权书 §至匦丛5：墨蛏星量盥瞳：!查叠经蕴直塑筮焦生敛佳嗣≥系本人在中国协和 医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系攻读盟±学位期间在导师指导下 完成的簋±学位论文。本论文的研究成果(包括申请的专利)归中国协和医科大 学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人完全了解中国协和 医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文 的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国协和医科大学，可 以影印、缩印或其它复制手段保存论文。论文的全部或部分内容将根据论文所承 担国家或地方级课题的要求，与导师商定后，予以发表。论文相关的所有实验材 料归课题组所有，未经课题组长和导师同意，不得提供给他人。 日期 砷年 岁月lYD 撕机冬嘈力① 丹 日期∞口7年厂月，Z日 中国协和医科大学博士学位论文中文摘要 中国协和医科大学博士学位论文 中文摘要 脊椎动物的中枢神经系统(CNS)是非常复杂并具有高度组织性的系统，细胞的多 样性是神经系统的显著特征之一。尽管神经元和胶质细胞都具有重要功能，但目前对 其发育和分化的具体机制仍不清楚。已知在神经系统发育和功能形成过程中，需要众 多转录因子和细胞粘附分子共同作用。在本研究中，我们主要利用功能获得和功能缺 失方法，对转录因子Bhlhb5，SoxE以及细胞粘附分子Neel．1在神经元和少突胶质细 胞发育中的作用进行研究。 大量证据表明bHLH(basic helix．100p-helix)转录因子对神经细胞的命运决定与 分化起重要调节作用。Bhlhb5即是一种bHLH转录因子，与Oligl，Oli92，Oli93和 Bhlhb4一起同属于Olig家族成员。本研究中，我们利用新制备的抗Bhlhb5多克隆抗 体进行免疫组织化学染色并结合BrdU标记实验，研究了Bhlhb5在脊髓发育过程中 的时空表达。在脊髓(E10．5)发育早期，Bhlhb5表达于脊髓背部的d16中间神经元及 腹部的vl与V2中间神经元区域。在发育的晚期(E17．5)，Bhlhb5表达在晚期产生 的背侧中间神经元，这些神经元可迁移至背部更表层的位置。BrdU标记和免疫双标 记实验提示Bhlhb5阳性的dIL神经元主要产生于E12．5及之后的背部神经前体细胞。 以上结果提示在E14．5至E17．5时期，Bhlhb5+的中间神经元迁移至更靠背部的细胞 层中。推测Bhihb5在脊髓发育中的中间神经元中神经递质的产生和转换相关。 SoxE亚族包括Sox8，Sox9和Soxl0三个蛋白分子，属于Sox(SRY相关HMG-box 基因1基因编码的一个成员众多的转录因子超家族。Sox蛋白分子参与包括神经嵴， 生殖腺，骨骼和中枢神经系统在内的不同发育过程。以前有关SoxE蛋白对脊髓神经 发育影响的证据主要来源于对Sox功能缺失动物的研究，认为少突胶质细胞的发育过 程中，SoxE蛋白呈现出功能的冗余性。在本研究中，我们采用鸡胚电穿孔方法来揭 示SoxE蛋白对神经元和少突胶质细胞发育的影响。首先原位杂交实验显示了SoxE 在鸡胚胎脊髓的表达模式。此结果提示Sox9与神经元和少突胶质前体细胞的产生相 关，而Sox8和soxl0则参与少突胶质细胞的分化决定。于鸡胚脊髓过表达Sox8和 Sox9在脊髓发育的早期即可诱导少突胶质细胞的产生，并促进少突胶质细胞的分化。 相反，在鸡胚脊髓过表达Sox9时，中间神经元和运动神经元标志物的表达水平也呈 现下调。说明过表达Sox9可以抑制神经元的分化。为了阐明soxE蛋白之间的相互作 2 中国协和医科大学博士学位论文用关系，当用电穿孔法过表达其中一个 中国协和医科大学博士学位论文 用关系，当用电穿孔法过表达其中一个SoxE家族成员，检测其它成员的表达情况。 结果提示不仅SoxE蛋白之间存在相互诱导作用，SoxE蛋白与其它在少突胶质细胞发 育中起关键作用的转录因子之间都存在相互作用关系。为了分析SoxE蛋白具体的分 子作用机制，将DNA结合基序HMG与VPl6蛋白的激活结构域和EnR的抑制结构 域相融合分别构建表达载体。在鸡胚中过表达后，