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(2013·新课标卷Ⅱ)临床试用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题: (1)为了从样本中获取致病菌菌落,可用________法或________法将样本借种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释,用________法接种于固体培养基表面,在37 ℃培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A,B,C,D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A________;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B________;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明________;含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的________。 (4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选择抗生素________。 【解析】 本题考查微生物的培养和应用。 (1)分离菌落常用稀释涂布平板法或划线涂布法。 (2)取该单菌落适当稀释,用涂布法接种于固体培养基表面,适宜温度培养。 (3)含抗生素的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对该抗生素有敏感性,周围没有透明圈的说明该抗生素不具有敏感性。透明圈越大的敏感性越强。 (4)实验结果抗生素A对该致病菌的作用最好。 【答案】 (1)划线 稀释涂布(或涂布) (2)涂布 (3)敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A弱 耐药菌 (4)A [误区警示] (1)在同一稀释度下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。如果某个平板的菌落数与其他差别甚远,说明该平板操作过程中出现失误,应舍弃。 (2)统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 【解题技巧】 对照原则的运用 (1)判断培养基中是否有杂菌污染,需将未接种的培养基同时进行培养。 (2)判断选择培养基是否具有筛选作用,需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养,观察两种培养基上菌落数目,进行对比得出结论。 [演练提升] 3.(2013·广东深圳模拟)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量,并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是 ( ) A.利用平板划线法对细菌进行计数 B.以石油为唯一碳源的培养基筛选 C.采用稀释涂布平板法分离菌种 D.称取和稀释土壤时应在火焰旁 A [平板划线法能对细菌分离纯化,但不能对细菌进行计数,稀释涂布平板法可以分离菌种还可进行计数,A错误。] 4.(2013·上海卷)回答下列关于微生物的问题。 阿拉伯胶是一种多糖,研究者从某地合欢树下距离地表深10~15 cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01,以下为该菌株的鉴定过程。 (1)为获得单菌落,可采用________法将初筛菌液接种在________培养基上。 (2)SM01的菌落为粉白色,菌落初期呈突起絮状,在显微镜下观察到,菌丝白色致密,且有分生孢子,细胞核直径约 1 μm,初步推测为真菌,则其特征中,最能说明SM01是真菌的是________。 A.菌落初期呈突起絮状 B.菌落粉白色 C.有菌丝,白色致密 D.有细胞核,且有分生孢子 (3)SM01还一定具有的结构有________(多选)。 A.细胞膜 B.核糖体 C.拟核 D.荚膜 E.芽孢 F.菌盖 (4)下表中培养液pH均为6.0,若对SM01中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定,则应选用表中的________培养液,针对不选用的其他培养液,分别说明原因:①________________;②________________;③________________。 表 实验用培养液配方 解析 平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作,稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养,这两种方法都可以获得单个菌落。 答案 (1)划线法/涂布法 固体 (2)D (3)A、B (4)D ①A培养液缺少氮源,SM01不能很好生长 ②B培养液缺少氮源,SM01不能很好生长;且有阿拉伯胶酶,会影响对SM01自身产生的酶活力的测定结果 ③C培养液缺乏阿拉伯胶酶催化底物阿拉伯胶,会影响SM01的生长,也无法对阿拉伯胶酶活力进行测定 [关键点击] 1.选择培养基与鉴别培养基 分解纤维素的微生物的分离
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