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实验 蛋白质标准曲线的制作;一、实验目的;二、实验原理;考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式,红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合,在一定蛋白质浓度范围内,蛋白质和染料结合符合比尔定律(Beer’s law)。此染料与蛋白质的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残结合,通过测定595nm吸光度可测定蛋白质的含量。另外,反应体系中呈现的颜色变化主要是G-250分子间疏水相互作用形成的聚集体聚集程度不同引起的。单体形式表现为蓝色,单体和聚集体共存时表现为绿色,全为聚集体形式呈现为棕红色。影响因素主要为溶液体系中磷酸、乙醇、NaCl的含量。
;;三、实验仪器和试剂;;四、实验步骤;以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为200μg、400 μg、600μg、800 μg、1000 μg),在坐标轴上绘制标准曲线。
1. 利用标准曲线查出回归方程。
2. 用Excel作图,测出回归线性方程。即A595nm=a×X。相关系数一般大于0.9。
3. 未知样品蛋白质浓度的测定:
;;五、注意事项:;六、问题与思考
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