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3.胚胎干细胞: 【高考警示】(1)滋养层≠饲养层。 ①滋养层:囊胚时期沿透明带内壁扩展和排列的、个体较小的细胞,滋养层最终发育成胎膜和胎盘。 ②饲养层:饲养层细胞一般为输卵管上皮细胞,在干细胞培养时,可作为提供干细胞分裂、增殖的营养细胞。 (2)不同动物胚胎移植的时间不同。 ①牛、羊要培养到桑椹胚或囊胚阶段。 ②小鼠、家兔在桑椹胚前。 ③几乎所有动物都不能到原肠胚阶段移植,因为此时分化程度高,移植成功率很低。 【考题回访】 1.(2014·福建高考)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图: (1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 。 (2)步骤②中,重组胚胎培养到 期时,可从其内细胞团 分离出ES细胞。 (3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2 基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用 HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。 为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。 (4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞 的 ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。 【解题指南】(1)关键知识:检测目的基因表达的方法是抗原-抗体杂交(免疫)法。 (2)图示信息:过程①利用了动物细胞核移植技术;过程②利用了胚胎工程技术;过程③利用了基因工程的相关技术。 【解析】本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程技术。 (1)步骤①是核移植过程。体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核,原因是若不去掉卵母细胞的细胞核,就会造成细胞里面有两个细胞核,使得遗传物质不稳定。 (2)ES细胞是由早期胚胎(囊胚)的内细胞团分离出来的一类细胞。 (3)步骤③为获取目的基因,并把目的基因导入受体细胞的过程。在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因,其条件是模板DNA、根据Rag2基因的核苷酸序列设计的引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等,另外根据题干可知,获得Rag2基因需要用HindⅢ和PstⅠ限制酶,所以在构建表达载体时,所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。 (4)检测目的基因是否翻译相应蛋白质时,应采用抗原—抗体杂交(免疫)法,即提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原—抗体杂交,看是否有杂交带。 答案:(1)细胞核 (2)囊胚 (3)核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ (4)蛋白质 2.(2014·山东高考)人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下: (1)htPA基因与载体用 切割后,通过DNA连接酶 连接,以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞 DNA,可采用 技术。 (2)为获取更多的卵(母)细胞,要对供体母羊注射促性腺激素,使 其 。采集的精子需要经过 ,才具备受精能力。 (3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是 。为了获得 母羊,移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。利 用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体,这体现了早期 胚胎细胞的 。 (4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ,说明目的基 因成功表达。 【解题指南】(1)图示信息:转htPA基因母羊羊乳的获得过程。 (2)关键知识:用同种限制酶切割目的基因与载体,获得相同的黏性末端,才能进行碱基互补配对。 【解析】本题主要考查基因工程和胚胎工程。 (1)为保证切割后的载体与切出的目的基因具有相同的黏性末端,应用同种限制酶切割目的基因和载体。 (2)为获取更多的卵(母)细胞,需要对供体母羊进行超数排卵处理。采集的精子需要经过获能处理后,才具备受精能力。 (3)将目的基因导入动物细胞的常用方法是显微注射法。为获得某一性别的动物,在胚胎移植前需进行性别鉴定。胚胎分割技术可看作克隆,这体现了早期胚胎细胞的全能性。 (4)目的基因成功表达的标志是检测到相应的目的基因控制合成的产物。 答案:(1)同种限制性核酸内切酶(或同种限制酶) DNA分子杂交(或核酸探针) (2)超数排卵 获能(处理) (3)显微注射法 性别鉴定 全能性 (4)htPA(或人组织纤溶酶原激活物) 【加固训练】 1.(2015·沈阳模拟)长期以来,优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈,近年来发展起来的细胞工程和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机,请据图完成下列问题: (1)在试管牛和克隆羊的培育过程中都必须用到的生物技术 有 、 。 (2)与受精和受精后有
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