兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应.docx

兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应 作者：李栋，沈柏均，侯怀水，时庆，张乐玲1,马秀 峰 【摘要】 为了研究兔骨髓间充质干细胞(rBM -MSC)的 生物学特征及其对不同生长因子的反应，使用贴壁培养法从 兔骨髓单个核细胞中获得间充质干细胞，在光学显微镜和电 子显微镜下观察其基本生长行为和生物学特征；使用流式细 胞仪检测rBM-MSC的免疫学表型;RT-PCR法检测其胶原表达; 诱导r BM-MSC多向分化并使用特异性染色和RT-PC R予以鉴 定；最后使用MT T法检测IL-1. 3、8和HGF对rBM-MSC生 长增殖的影响。结果显示：贴壁生长的rBM-MS C具有典型的 成纤维样细胞形态，可传15代以上，第5代rBM-MSC高表达 基质受体CD44,低表达造血细胞标记CD45； R T-PCR显示高 表达I型胶原，弱表达II型胶原，不表达X型胶原；在不 同的诱导条件下，rBM-MS C可被诱导分化为成骨细胞、软骨 细胞、脂肪细胞和神经元样细胞。rBM-MS C对IL-3最为敏 感，1 Ong/ml的低浓度IL-3可显著促进细胞增殖达32%以 上，而高浓度IL-3能显著抑制其生长。结论：分离培养了 rBM-M SC,其生物学特征与人和彳弥猴等BM-MSC相似的生物学 特性，低浓度IL-3可有效促进其增殖。 【关键词】 骨髓；间充质干细胞；生长因子；兔 Bi ologicalChar acteristicso fRabbitBoneM arrowMesench ymalStemCell sandTheirRes ponsetoDiffe rentGrowthFa ctors Abstra ctThisstudyw asaimedtoana lyzethebiolo gicalcharact eristicsofra bbitbonemarr owmesenchyma lstemcells (r BM-MSCs)andt hEirresponse todifferentg rowthfactors . RabbitBM~MS Csweresepara tedfrombonem arrowmononuc learcellsbyu singadherent cultivation. Biologicalch aracteristic swereinvesti gatedbyoptic alandelectro nmicroscopy. Immunophenot ypeofrBM~MSC swasmeasured byflowcytome try. Theexpressionofcolla genwasdetectedbyRT-PCR?D ifferentiati onpotentialw asidentified byspecificst ainingandRT-PCR? Therespo nseofrBM-MSC stoILT,3,8a ndHGFwithdif ferentconcen trationswere testedbyMTT. Theresultssh owedthatther BM-MSCsgaver isetoapopula tionofadhere ntcellschara cterizedbyth epresenceofa predominantc elltypewitha typicalfibro biast一likemo rphologyandc ouldbecultur edforoverl5p assages? CD44 washighlyexp ressedonF5rB genwasdetect M-MSCs(32%)a ndCD45waslow lyexpressed(%).Typelcoll agenwashighlyexpressed,w hiletypellco llagenwaslow lyexpresseda ndtypeXcolla genwasnotdet ectedonrBM~M SCsusingRT-P CRmethod? Inv arious condi tionsinducti ngdifferenti a/tion,rBM-MS Cscoulddiffe rentiateinto theosteoblas t,chondrocyt e,adipocyteandneuron-lik ecells? TherB M-MSCswerese nsitivetoIL- 3, evenlowcon centration(1 Ong/ml)ofIL-3couldpromot etheprolifer ationofrBM-M SCseffective ly(32%,