课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

问题：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 之后讲课本P22的最上面内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【课题目标】 研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 【研究对象】 土壤中能分解尿素的细菌 【达到目的】 （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 尿素分子的立体结构 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3 脲 酶 分解尿素的细菌: 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 1、实例： 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应(PCR技术)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 一、筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 选择培养基 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、本课题所使用的培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ ③此培养基能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 能。该培养基以尿素作为唯一的氮源，只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 （二）微生物计数 1、显微镜直接计数法 1mm 缺点： 不能区分死菌与活菌 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　 1mm 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少? 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　　 5AB×104 5A 缺点： 不能区分死菌与活菌 1、显微镜直接 计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 二.统计微生物数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 稀释涂布平板法。 思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。 相关计算 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均