功能性质的测定试验计划.docxVIP

实验主要测定不同条件下提取米糠蛋白，通过对其功能性质的测定，优化其提取工艺从而得 到功能性质相对较好的米糠蛋白. 不同条件主要指碱溶时水浴温度，时间，ph这三个因素的改变 那么提取蛋白主要进行单因素分析： 那么 ph： 9 , 10 , 11 时间：1.5h , 2h , 2.5h , 3h 温度：30 , 40 , 50 , 接下来是功能性质的测定，主耍测得的功能性质有：溶解性，起泡性和泡沫稳定性，乳化性, 溶解性：采用福林酚法测定 蛋白质的起泡性测定方法 配制10ml 1%蛋口分散液(pH 05的0.05mol/LTris-HCl缓冲液)，在室温的条 件下，利用高速分散机均质1 min,快速转移到25ml的量筒中，,每30min记录 一次泡沫体积。每个样品重复三次，取平均值。 乳化性及乳化稳定性的测定方法 用0.05 mol/LTris-HCl缓冲液(pH 7.5)配制1%的蛋白样品，取1 mL色拉油与 3 mL待测溶液于均质机中均质剪切lmim分别于Omin和1 Omin时从底部取50 |1L 用 0.1% SDS 25 mL 稀释后测 OD500 乳化活性指数(EAI)=(2.303 X 2 x OD5oo )/(C x ① xL) 乳状液稳定指数(ES)=OD5oo x At/AODsoo 式中： EA1 每克蛋白质的乳化面积，m2/g； ①——油相所占的分数，在本实验中油相占1/4； C——蛋口质的浓度，1%； L 比色池光径，lOmrrio 各测定过程除特别说明外，均在室温下进行，重复3次，以平均值作为试验结果。 Tris-HCl 缓冲液(0.05 mol/L) 50奄升0.1 mol/L三轻甲基氮基甲烷(Tris)溶液与X亳升0?1mol/L盐酸混匀并稀释至100亳升。 pH (25C)X(mL) 7.10 45.7 7.20 44.7 7.30 43.4 7.40 42.0 7.50 40.3 7.60 38.5 7.70 36.6 7.80 34.5 8.00 29.2 8.10 26.2 8.20 22.9 8.30 19.9 8.40 17.2 8.50 14.7 8.60 12.4 8.70 10.3 8.80 8.5 8.90 7.0 Tris分子量= 121. 14 ； 0. 1 mol/L溶液为12.114 g/Lo Tris溶液可从空气中吸 收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 吸油性测定 取10g蛋白样品屮加入50mL精制大豆油，用玻璃棒搅拌均匀，静置30min后用1000r/min 的速度离心lOmin,记下游离油的体积，结果以每g蛋白样品吸附油的ml数表示。 离心前有的体积一离心后油的体枳蛋白样品质量 凝胶性测定 llg样品分散到70ml (2. 5%)的NaCT溶液中，组织捣碎机中均质(12 OOOrpm) 2min,均质后的样品，放入烧杯1j4并用保鲜膜封口后，80°C水浴60min,用水冷却 至室温，置冰箱3h,取出凝胶物放在平皿内，观察凝胶性。 看现象 持水性测定 4. 0g样品分散于70g水中，80°C水浴60min后冷却至室温，3000rpm离心 lOmin,弃去上清液，擦干离心管内外壁所附着的水分，称沉淀重量。 持水性(%)=(沉淀重量/样品重量)X 100% 持油性测定 0g样品分散于70g大豆色拉油中，80°C水浴60min后冷却至室温，3 OOOrpm离心lOmin,弃去上清液，擦干离心管内外壁所附着的油脂和水分，称沉淀 重量。持油率(%)二(沉淀重量/样品重量)x 100% 4?乳化性：(1.2g) 药品：高速搅拌桨(10000r/min)离心机、离心管、烧杯、玻璃棒、微量 注射器、托盘天平、水浴锅、大豆油、大豆蛋白、SDS、NaH2P04 Na2HP04 用0.2mol/L PH7.0的磷酸缓冲溶液配制1%的蛋白溶液与人豆油加入比例为4： 1, 最高转速卜(10000rpm)均质lmin,然后分别在Omin和10min从烧杯底部吸取 100uL乳状液，用10mL0.1%SDS (十二烷基硫酸钠)溶液稀释。在500nm条件 下，以0.1%的SDS为 空白样，测定吸光值。 ESI= (AO*t) /A0-A10 式中，EST 一乳化稳定性(min)； A 0 —均质后迅速被稀释的乳化液的吸光值； A10 —乳化液在静止lOmin后的吸光值； t 一时间（本实验是lOmin） o EAI二2*T*[ （A0*稀释倍数）/ （C*①*1000）] 式中,EA1 —乳化活性（ml/g）； T=2. 303； C—乳化液形成前蛋白质水溶液中蛋白浓度（g/ml）； 乳化液中油的体积分数（本实验是0. 25） 稀释倍数10倍。 吸油性： 向5.00 g干试样中加油15 m