实时荧光定量PCR法快速检测赤潮环状异帽藻-中国水产科学.pdf

第17卷第2期 中国水产科学 Vol.17 No.2 2 0 1 0 年 3 月 Journal of Fishery Sciences of China March 2010 实时荧光定量PCR 法快速检测赤潮环状异帽藻 1，2 2 1，2 石彦红 ，张凤英 ，马凌波 （1. 上海海洋大学 生命科学与技术学院，上海 201306；2. 中国水产科学研究院 东海水产研究所，农业部海洋与河口渔业资源 及生态重点开放实验室，上海 200090） - 摘要：以环状异帽藻（ ） ITS1 区为靶序列设计了一对特异性引物，运用 Realtime PCR 方法，对 Heterocapsa circularisquama 环状异帽藻进行了定性定量检测。以其他 9 种赤潮微藻为对照验证其特异性。结果表明，仅含环状异帽藻 DNA 模板的 样品有扩增，其他藻没有检测到扩增信号。以超声波破碎得到的藻液为标准品，所得标准曲线具有高度线性相关，相关 系数R2 为 0.989，并且可以在 30 个循环内检测到 0.5 个细胞。对在不同培养条件下获得的环状异帽藻 DNA 样品进行检测， 都能获得扩增信号。利用该方法建立的标准曲线对初步模拟现场样品进行定量检测，与显微镜计数结果基本一致。[ 中 国水产科学，2010，17（2）：267-273] - 关键词：环状异帽藻；Real time PCR；ITS1；鉴定；定量检测 中图分类号：S835　　　　　　 文献标识码：A　　　　　　 文章编号：1005-8737- （2010）02-0267-07 环状异帽藻（ ）属有 技术鉴定和定量赤潮微藻 [9-12] 。因此，如何利用分 Heterocapsa circularisquama 毒赤潮藻类，于 1988 年在日本西海岸首次引发赤 子生物学技术找到种间界定的稳定指标，进而建立 潮，造成大量贝类死亡 [1-2] 。近年来在中国的大连 快速、准确的鉴定和定量检测方法，已成为浮游植物 [ ] [ ] 海岸也有类似赤潮发生 3 。2005 年王金辉等 4 对 生态学研究的热点之一， 也是在实现赤潮监测和预 长江口及邻近海域有毒藻进行了调查，发现在该海 警过程中亟待解决的问题。 域引发赤潮的微藻是环状异帽藻。据报道，环状异 近年来，PCR（Polymerase chain reaction）方法 帽藻可产生一种光敏感性溶血毒素（photosensitizing 已成为微生物领域重要的检测手段 [13-15] 。此基础 - hemolytic toxin），低浓度情况下就可以使贝类致死， 上发展起来的实时荧光定量 PCR（Real time RCR） 而对鱼类无害 [5-7] 。为更深入了解环状异帽藻的种 技术