第3章工业菌种的选育及改进.ppt

（二）优良载体的选择 基因工程使用的载体分为克隆载体和表达载体。无论原核基因还是真核基因要在大肠杆菌中复制和表达，都必须将其与合适的表达载体连接后导入宿主细菌，才能表达成蛋白质。 2、表达载体 表达载体必须具备以下条件： 1）应具有很强的启动子，能被大肠杆菌的RNA聚合酶识别。 【启动子是指在一条DNA链内，在转录起始期间可以被RNA聚合酶识别并结合的一段DNA序列。转录起始位点通常在启动子序列内。】 2）应具有使启动子受到抑制的阻遏子，只有在受到诱导时才能进行转录。 因外源基因的高效表达往往会抑制宿主细胞的生长、增值，而阻遏子可使宿主细胞免除此不良影响。 例如可先使宿主细胞快速生长增值到相当量，再通过瞬时消除阻遏，使所表达的蛋白质在短时间内大量积累，同时也可减少表达产物的降解。 阻遏子的阻遏作用可以由物理（如温度）、化学（如IPTG、IAA等）因素进行调节，这样可人为地选择启动子启动转录mRNA的时机。 3）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号，即起始密码AUG和SD序列（核糖体结合序列）。 4）应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因。同时强终止子所产生的mRNA较为稳定。 诱导表达时，由于强启动子所致的高水平转录反过来会影响质粒DNA自身的复制，