第十一章发酵的实验室研究中试放大.pptVIP

第十一章 发酵过程的研究及其放大 工业发酵过程的研究分为三部分 实验室规模:进行菌种筛选和培养基的研究； 小试和中试:确定最佳的发酵条件； 大试：大规模生产，取得最终的经济价值 一.实验室研究 1.实验设备 2.实验室研究 （1）菌种保藏：最佳的保藏方法应该有利于提高菌株的成活率，遗传稳定性 （2）固体培养基的筛选：能够使菌株生长旺盛，性状稳定，繁殖力增强。比如产孢培养基 3.摇瓶实验 （1）瓶塞对氧的阻力 均匀设计表U7(76) 二. 摇瓶培养与发酵罐培养的差异 2.CO2浓度 摇瓶培养一般情况下式常压，发酵罐则处于正压范围，因而CO2的溶解度较大，对整个发酵过程（特别是次级代谢过程）的影响不同（第八章）。 3.菌丝损伤 摇瓶发酵对菌丝或细菌细胞的损伤较小；发酵罐的搅拌速度，搅拌时间，搅拌浆叶尖线速度，培养液单位体积吸收的搅拌功率及体积氧传递系数等都会影响菌丝的损伤。另外，菌丝对搅拌损伤的敏感性也有关系。 4.发酵规模改变的影响 （1）菌体繁殖代数 :繁殖代数Ng与发酵液的体积的对数呈直线关系。 缩小（scale down） ：将大规模发酵生产中的环境条件应用到中小型发酵设备中，以保证在中小设备中进行的研究结果能够在大规模发酵生产中重现出来 放大（scale up）: 将实验室和中试车间所取的的试验结果应用到工业性的大规模发酵生产中去的转移过程。 2.放大的理论基础 （1）物理学基础 3.放大或缩小的方法 （1）单位体积所输入的功率为基础： 目前的放大或缩小的发酵生产多采用几何相似发酵罐和单位体积功率相等来进行操作。 在青霉素发酵放大中：采用中试罐试验取得产物浓度和输入功率的关系曲线，在一定单位体积输入功率下所得效价最高，按照此功率放大到一定倍数的发酵罐中。 思考题 均匀设计的特点？ 摇瓶培养和发酵罐培养存在那些差异？发酵规模的放大引起发酵参数的改变有那些？ 简述发酵规模的放大和缩小的理论基础和采用的基本方法？ * * 实验室设备 实验室研究的内容 摇瓶实验的影响因素 统计学方法在优化过程中的应用 摇瓶培养与发酵罐培养的差异 发酵规模改变的影响 发酵规模的放大或缩小 内 容 提 要 摇瓶机 无论是何种发酵设备都需要有一定的发酵条件：培养基组成，发酵温度，pH，溶解氧以及适当的辅助仪器。 小型发酵罐 （3）液体培养基的选择及最佳配比 （4）实验室放大的培养技术（主要考虑溶氧，搅拌，种子等问题） 摇瓶发酵中的无菌空气是靠瓶塞的过滤作用产生的，一般常用的有4层或8层纱布，脱脂棉面塞，橡胶塞，透气膜等等，这样必然会对氧的传递造成阻碍。实践操作中，要根据发酵对象的不同选择合适的封口模式。 （2）水蒸发的影响 由于发酵过程存在发酵热，并且某些纯培养过程发酵温度在30℃以上，因此，必然会造成发酵液中水分的蒸发散失，可能对发酵造成影响（影响菌体浓度以及培养液体积和通气溶氧）。 红霉素链霉菌34 ℃发酵装量20ml/100ml，发酵162h后蒸发量为10ml。对照实验中在发酵起始就加入10ml水，最终得到发酵单位高于不加10ml水的发酵单位。 （3）比表面积的影响 摇瓶的氧是由表面通气供给的，受摇瓶机（摇床）振荡的频率和振幅大小，装液量以及摇瓶的形状等因素决定。 另外还要考虑：微生物培养过程中摇瓶的装液量，瓶塞的透气性，培养参数（种龄，接种量等），终止发酵时间等；摇瓶机的稳定性，可靠性等。 4.统计学方法（正交设计和均匀设计） 均匀设计（uniform design）:均匀分散，整齐可比，每个试验点具有更好的代表性，试验次数大大降低。 （1）试验次数低，每个因素每个水平只做一次试验，试验次数与水平数相等；正交设计中试验次数是水平数平方的整数倍 （2）适当调整水平顺序，可以避免高（低）档次相遇，以防止出现以外现象 （3）利用计算软件进行试验数据的处理，快速求得回归方程，便于分析各因素对试验结果的影响。 1 2 3 4 5 6 7 7 7 7 7 7 7 1 2 3 4 5 6 6 2 4 6 1 3 5 5 3 6 2 5 1 4 4 4 1 5 2 6 3 3 5 3 1 6 4 2 2 6 5 4 3 2 1 1 列 号 试验号 1，2，3，6 4 1，2，3 3 1，3 2 列 号 因素数 U7(76)表的使用 均匀设计表 U7(76) 试验次数 水平数 正交设计表 L9(34) 试验次数 水平数 1.K Lα和溶解氧 1.96 2.96 6.87 11.