疾病的病理学诊断和研究方法讲义.pptxVIP

疾病的病理学诊断和研究方法第一节 大体、组织和细胞病理学技术第二节 组织化学与组织细胞化学技术第三节 电子显微镜技术第四节 显微切割技术第五节 激光扫描共聚焦显微技术第六节 核酸原位杂交技术第七节 原位聚合酶链反应技术第八节 流式细胞术第九节 图像采集和分析技术第十节 比较基因组杂交技术第十一节 生物芯片技术第十二节 第二代测序技术第十三节 生物信息学技术第十四节 人工智能技术重点难点掌握病理学诊断和研究基本方法。熟悉病理学诊断和研究方法的具体应用范围和意义。了解病理学研究方法的基本原理。第一节大体、组织和细胞病理学技术病理学（第9版）（一）大体观察主要运用肉眼或借助放大镜、量尺和磅秤等工具，观察被检物体的形状、大小、重量、色泽、质地、界限、表面及切面形态。病理学（第9版）（二）组织病理学观察 将肉眼确定为病变的组织取材后，以福尔马林溶液固定和石蜡包埋制成组织切片，经不同的方法染色后用光学显微镜观察。病理学（第9版）（三）细胞病理学观察 采集脱落的细胞，自然分泌物、体液及排泄物中的细胞，以及通过细针穿刺所吸取的细胞，涂片染色后进行观察和诊断。病理学（第9版）甲状腺细针穿刺细胞学显示甲状腺乳头状癌细胞，箭头示核沟 （HE染色，400×）乳腺细针穿刺细胞学显示乳腺纤维腺瘤细胞学改变（HE染色，400×）病理学（第9版）宫颈液基细胞学显示多量表层细胞（HE染色，400×）涎腺细针穿刺细胞学显示黏液样基质及浆细胞，箭头所示（HE染色，400×）病理学（第9版）（四）液体活检技术CTCs检测流程图第二节组织化学和免疫组织化学技术病理学（第9版）（一）组织化学通过应用某些能与组织或细胞的化学成分进行特异性结合的显色试剂，显示病变组织、细胞的特殊化学成分（如蛋白质、酶类、糖类、脂类等）保存组织原有的形态改变，达到形态与代谢的结合病理学（第9版）肺组织黏液卡红染色显示隐球菌荚膜呈紫红色染色（200×）肺组织隐球菌PAS染色 显示隐球菌荚膜（200×）病理学（第9版）肝组织Masson染色 汇管区胶原纤维呈蓝色（400×）肝糖原PAS染色 肝细胞内糖原呈紫红色染色（400×）病理学（第9版）肝组织罗丹宁染色 肝细胞内铜颗粒沉积呈橘红色（400×）肝组织普鲁士蓝染色 肝细胞内含铁血黄素颗粒呈蓝色（400×）病理学（第9版）（二）免疫组织化学和免疫细胞化学 免疫组织化学（IHC）和免疫细胞化学（ICC）是利用抗原-抗体的特异性结合反应以检测和定位组织或细胞中的某种化学物，由免疫学和组织化学相结合而形成。病理学（第9版）1. IHC染色方法和检测系统2. IHC染色的结果判读免疫组化染色中常用的标记酶及其底物检测系统产物颜色封片HRP-DAB棕色中性树胶HRP-AEC红色甘油AKP- BCIP / NBT深蓝色中性树胶HRP：辣根过氧化物酶；DAB：二甲基联苯胺；AEC：3-氨基-9-乙基咔唑；AKP（ALP）：碱性磷酸酶；BCIP / NBT：5-溴-4 氯-3吲哚磷酸盐/氯化硝基四氮唑蓝2. IHC染色的结果判读DCABA.细胞膜阳性（E-cadherin）；B.细胞质内弥漫阳性（Hep Par-1）；C.细胞核阳性（Ki67）；D.细胞膜和细胞质内点状阳性（CD30）病理学（第9版）3. IHC染色技术的应用各种蛋白质或肽类物质表达水平的检测细胞属性的判定淋巴细胞免疫表型分析激素受体和耐药基因蛋白表达的检测细胞增殖和凋亡的研究细胞周期和信号传导的研究疑难肿瘤的诊断与鉴别诊断、有些组织特异性抗原的检测辅助肿瘤组织来源的判断以及内分泌系统肿瘤的功能分类肿瘤预后评估以及指导临床对靶向治疗药物适用病例的筛选第三节电子显微镜技术电子显微镜技术应用领域广泛：胚胎及组织发生学的观察和研究临床上多种疾病亚细胞结构病变的观察和诊断一些疑难肿瘤的组织来源和细胞属性的判断细胞凋亡的形态学观察扫描电镜还可对样本进行三维形貌的细微显示和定量肿瘤组织微血管形态的扫描电镜观察肿瘤组织微血管形态的电镜观察第四节显微切割技术病理学（第9版）显微切割术（microdissection）是从组织切片或细胞涂片上的任一区域内切割下几百个、几十个某一特定的同类细胞群甚至单个细胞，再进行后续相关的研究，如PCR、PCR-SSCP及比较基因组杂交等。冷冻切片的激光显微切割左图：被切割细胞的定位；右图：切割后组织切片上留下的空隙第五节激光扫描共聚焦显微技术病理学（第9版）LSCM的主要功能细胞、组织光学切片细胞属性的判定三维立体空间结构重建对活细胞的长时间动态观察细胞内酸碱度及细胞离子的定量测定细胞间通信、细胞骨架构成、生物膜结构等的研究细胞膜流动性测定和光活化技术胶质瘤干细胞的分布和培养第六节核酸原位杂交技术病理学（第9版）（一）探针的选择和标记 双链cDNA