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[核心精要]
1.平板划线法和稀释涂布平板法的比较
项目
平板划线法
稀释涂布平板法
接种工具
接种环
涂布器
操作难易程度
操作较简便
需要先进行梯度稀释,操作相对烦琐
可否用于观察菌落特征
可以
可否用于计数
不可以
可以
2.纤维素分解菌与尿素分解菌的分离及鉴定的比较
项目
尿素分解菌的分离与鉴定
分解纤维素的微生物的分离与鉴定
条件
尿素为唯一氮源
纤维素为唯一碳源
鉴定方法
在培养基中加入酚红指示剂
在培养基中加入刚果红溶液
鉴定原理
细菌合成的脲酶使尿素分解成氨,氨使培养基pH升高,酚红指示剂变红
微生物产生的纤维素酶能使纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖,使刚果红—纤维素复合物无法形成而出现透明圈
步骤差异
土壤取样→样品梯度稀释→涂布平板→培养与观察
土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→挑取菌落→进一步鉴定
[对点训练]
1.下列有关微生物分离、培养和计数的叙述,正确的是( )
A.分离土壤中微生物时,需要先对土壤灭菌,再进行培养
B.测定土壤中细菌数量时,一般选用103~107倍的稀释液
C.测定土壤样品中的细菌数目,常用稀释涂布平板法或平板划线法进行计数
D.统计菌落数目时,当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落
D [分离土壤中微生物时,需要对培养基灭菌,但不能对土壤样品进行灭菌,A错误;由于土壤中各类微生物的数量不同,在进行分离和计数时,就需要按照不同的稀释度分别进行涂布,测定土壤中细菌的数量一般选择104、105、106倍的稀释液,B错误;测定土壤样品中的细菌数目常用稀释涂布平板法,平板划线法不能用于计数,C错误;统计菌落数目时,当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落,D正确。]
2.下列说法错误的是( )
A.因为土壤中各类微生物的数量不同,所以为获得不同类型的微生物,要按不同的稀释倍数进行分离
B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围不同
C.只有得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板,才说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落数的计数
D.牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显大于选择培养基上的菌落数,说明选择培养基已筛选出一些细菌
C [样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目,土壤中各类微生物数量不同,含量最多的是细菌,占70%~90%,其次是放线菌,最少的是真菌,所以为获得不同类型的微生物,要按不同稀释倍数进行分离;在同一稀释度下只要得到2个或2个以上的菌落数目在30~300的平板,就说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落数的计数;探究选择培养基是否具有选择作用,需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种后培养作为条件对照,若后者上的菌落数明显大于前者,说明前者具有筛选作用。]
3.下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述,正确的是( )
A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
B.筛选分解尿素的细菌时应以尿素作为培养基中的唯一营养物质
C.统计样品中的活菌数目时一般用平板划线法
D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,若指示剂变蓝,则表明筛选到了分解尿素的细菌
A [只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,A正确;筛选分解尿素的细菌的实验中,采用的是以尿素为唯一氮源的培养基,B错误;统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法,C错误;在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,如果pH升高,指示剂将变红,这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素,D错误。]
4.下列关于尿素分解菌和纤维素分解菌的分离与鉴定的叙述,错误的是( )
A.分离尿素分解菌需要以尿素为唯一的氮源
B.尿素分解菌能产生脲酶,纤维素分解菌能产生纤维素酶
C.两个过程中都需要梯度稀释
D.刚果红染色法也可以用于筛选尿素分解菌
D [分离尿素分解菌的培养基以尿素为唯一氮源,A正确。尿素分解菌和纤维素分解菌分别产生脲酶和纤维素酶,B正确。由于样品中目的菌的浓度较大,所以都要进行梯度稀释,C正确。刚果红染色法仅能用于纤维素分解菌的筛选,D错误。]
5.(2019·全国卷Ⅱ)物质W是一种含氮有机物,会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。
(1)要从土壤中分离目标菌,所用选择培养基中的氮源应该是________。
(2)在从土壤中分离目标菌的过程中,发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌,应该选择________菌落进一步纯化,选择的依据是__________________________。
(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源,若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源,请简要写出实验思路,预期结果和结论,
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