基因芯片检测技术及应用.pptVIP

* 基因芯片技术及其应用 基因芯片的诞生 1。 结构性基因组学 大规模测序 30亿对核苷酸 3-4万条基因 功能性基因组学 功能研究 3-4万条基因 基因芯片 开发基因资源 人类疾病的预防、诊断和治疗 基因芯片应运而生 基因的研究 基因由DNA分子构成，决定了一切动、植物，包括人类的生长、发育、疾病、衰老和死亡等所有的生命活动。近半个世纪来、科学家一直在研究基因，希望通过对基因的研究来探索生命的奥秘，了解人类疾病的本质，达到战胜疾病、提高健康水平、延长寿命，造福人类的目的。 五十年代DNA分子结构和半保留复制模型的建立， 六十年代基因编码的确定， 七十年代限定性内切酶的发现和DNA重组技术的建立， 八十年代PCR的发明， 九十年代人类基因组计划的实施， 预计到2000年上半年将完成人类基因组所有序列测定。 分子生物学的发展 推动了基因的研究 基因芯片是信息 时代的产物 90年代兴起的一项前沿 生物技术 横跨： 生命科学、 物理学、 计算机科学、微电子技术 光电技术、 材料科学 等现代高科技 高度集约化 大通量平行分析 高灵敏度 样品需要量小 基因芯片的特点 2. 基因芯片受到高度重视 参与者： 国外 美国能源部、卫生部、NIH、商业部、 司法部 中央情报局 Affymetrix, ClonTech, Nanogen, Vysis, Synteni, Genometrix, Naval Research Laboratory, Argonne Narional Laborarory, 斯坦福大学，宾夕 法尼亚大 学，牛津大学等。 国内 北京大学、清华大学、交通大学、复旦 大学、人类基因组南方研究中心和中科 院细胞生物研究所等。 基因芯片的原理 3. 核酸杂交技术 是基因芯片应用的基础。 其基本原理是将一系列的核酸片段固定在芯片载体上作为固相靶片段（ target ），待测的核酸片段人工标记上不同的荧光、或同位素等作为探针（ probe），一定条件下两者杂交，根据杂交后不同的信号即可获得靶片段的信息，进行计算机分析。 Northern 杂交 Dot Blot杂交 DNA芯片 PCR 制备固 相靶 基因 杂交 结果观察，信息分析 药物处理细 胞 总 mRNA Cy5 标记 未处理的细 胞总 mRNA Cy3 标记 固相介质 有硅片、二氧化硅、玻璃、尼龙膜、 塑料等。 探 针 mRNA， 或是以mRNA为模板合成的cDNA。 靶片段 DNA、寡核苷酸、RNA等。 标记物 常采用荧光剂，如Cy3、Cy5， 同位素、地高辛等。 生物芯片多种多样 DNA芯片 寡核苷酸芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 化学感受器与图像结 合的新型生物芯片 基因芯片的制作 4. 1.直接将核酸片段“点”至包 被过的芯片表面做靶片段 2.预先合成寡核苷酸，再将其固定至芯片表面作为靶片段 3.原位合成寡核苷酸靶片段 一般有三种方法 6400点的基因芯片 （面积 12X14 mm) 基因芯片的应用 5. 基因芯片具有 巨大的应用前景 1. 基因功能分析研究 2. 检测与疾病相关的基因, 进而用于疾病诊断 3. 药物筛选, 4. 检测基因突变 5. 其他 基因功能分析研究 将成千上万个我们克隆到的特异性靶基因固定在一块芯片上，对来源于不同个体不同组织不同细胞周期不同发育阶段不同分化阶段不同病变不同刺激（包括不同诱导不同治疗手段）下细胞内的mRNA或逆转录所得的cDNA进行检测，从而对这些基因表达的个体特异性组织特异性发育阶段特异性分化阶段特异性。进行综合评定与判断，极大加快这些基因功能的确立。 检测与疾病相关的基因, 进而用于疾病诊断 目前主要涉及： 癌症、 心血管疾病、 血液病、 遗传性疾病、 神经系统疾病、 部分感染性疾病、 免疫反应相关性疾病 毒物引起的损伤等。 Golub et al, Science , 286 (5439): 531, Oct 15, 1999 *