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用加压梯度毛细管电色谱分离哒嗪酮衍生物 江 正 瑾 , 高 茹 玉 , 阎 超 等 摘要：一种加压、梯度毛细管电色谱(pCEC)仪已经设计生产出来。这种多用仪器能够使用三种分离模式， 加压梯度毛细管电色谱(pCEC)、微径高效液相色谱(µHPLC)和毛细管电泳(CE) 。在pCEC 模式中结合了电 动力和压力推动样品经过毛细管填充柱，不需要改变流动相的组成就能进行好的选择性调节。这项技术也 易于进行梯度洗脱，更利于对复杂的混合物进行分离。这项研究通过对一有机酸和中性哒嗪酮衍生物混合 物的分离同µHPLC 相比较及评估。实验用的pCEC 使用一根熔融石英毛细管柱并填充3µm 粒径的十八烷 基键合相硅胶(ODS) 。在适宜的条件下十种哒嗪酮衍生物都实现了基线分离。比较用µHPLC 方法的分离结 果，pCEC 对于分离所有的中性物质和带电物质比µHPLC 的分离更强。对于压力、泵的流速以及电压对分 离的影响也做了研究。 关键词：毛细管电色谱(CEC) ；加压毛细管电色谱(pCEC) ；微径高效液相色谱(µHPLC) ；哒嗪酮 简介： 毛细管电色谱(CEC)是一种结合了高选择性的高效液相色谱(HPLC)和高柱效的毛细管 电泳(CE) 同时能分析中性物质和带电物质的微分离技术。CEC 分离中性物质的机理是基于 样品组分在流动相和固定相间的不同分配。对于带电物质，不同的电泳淌度是形成样品分离 的机理。由于CEC 中流动相受电渗流(EOF)的驱使且与填料粒径无关除非双电层发生重叠， 小的粒径能够实现更高柱效的分离。另外，在CEC 中EOF 产生柱塞状流型更提高了它的柱 效。尽管CEC 有了一定的发展并获得了声望，但是还存在着一些困难以及与柱子和仪器相 关的问题。要充分发挥CEC 的潜能，就需要发展一套类似于HPLC 的毛细管梯度洗脱技术， 以成功实现分离一个多组分的复杂样品。 到目前为止商业化的毛细管电泳(CE)仪已经被用来进行 CEC 的试验。然而，商业化的 CE 在它们目前的设计上因为柱子干结以及产生气泡的问题同CEC 运作不是很兼容。CEC 中压 力由一个或多个 HPLC 泵提供，压力能克服柱子干结与产生气泡问题。这项技术称之为加 压毛细管电色谱(pCEC) 。HPLC 的高液压同CE 的高电压结合发展出的pCEC 在多方面优于 单纯的CEC 。可以参阅几篇已发表的关于pCEC 的文献。尽管CE 可以用作分步梯度CEC ， 一个众所周知的缺点就是不能进行连续溶剂梯度洗脱 CEC 。有几篇发表的文章报道了用自 制的梯度CEC 系统获得了令人鼓舞的结果。 本文我们报道了发展加压CEC 系统包括一个溶剂梯度传输模块，一个高压电源装置，一个 可变波长UV/Vis 检测器，一个微量手动进样模块和一个数据处理系统。这个仪器能够用作 pCEC 、µHPLC 和CE ，它也能做溶剂梯度洗脱。本实验用专业的pCEC 系统通过对一有机 酸和中性哒嗪酮衍生物混合物的分离同 µHPLC 相比较及评估, 对于压力、泵的流速以及电 压对分离的影响也进行了研究。 试验 仪器: TriSepTM2000GV CEC 系统（通微分析仪器公司 Pleasanton, CA, USA ）由一个溶剂梯 度传输模块，一个高电压装置，一个可变波长紫外可见光检测器，一个微量手动进样模块 （20µL 进样阀）和一个数据处理模块。死体积在接头处约为500nL 。 材料: 两根毛细管柱由Unimicro Technologies Inc.(Pleasanton, CA, USA)提供，长度、内径分 别为210mm ×75µm 和150mm×150µm，填充以粒径3µm 的ODS 为固定相。实验一系列我 们有机合成实验室合成的哒嗪酮衍生物。红外光谱和元素分析确认了这些结构，展示在图二。 茴香酸、p-氯苯甲酸、苯甲酸和苯丙烯酸以及四硼酸钠从天津第三化工厂购得；磷酸二氢钾 从沈阳第一化工厂购得，以上试剂都是分析纯。乙腈和甲醇从河北新科化学品公司购得，为 色谱纯。使用去离子水。 样品: 样品化合物首先用甲醇溶解并定容在 10ml 容量瓶中，浓度约 1mg/mL。然后再将该 溶液用流动相在10mL 的容量瓶中稀释成约0.1mg/mL 。所有这些溶液都用0.22µm 的微孔滤 膜过滤。流动相A 为0.005M 的磷酸和0.0025M 的硼酸水溶液（pH=6.0 ），流动相B 为乙腈。 流动相在使用前用超声波脱气至少15 分钟。分离样品使用线性梯度洗脱（B 的比