第7章化学发光法.pptVIP

1.概述 化学发光与荧光的主要区别： 受激发时所需的能量来源不同 化学发光：需要化学反应过程中所提供的化学能激发而发光 荧光：光源激发而发光 1.2.化学发光分析具有以下特点 （1）灵敏度高——例：用荧光素酶和三磷酸腺苷ATP的化学发光反应，可测定低至2×10-17 mol·L-1 ATP （2）线性范围宽—— 一般有5~6个数量级 （3）仪器设备简单，成本低廉 （4）分析速度快，易实现自动化 （5）局限性：可供发光用的试剂有限 发光机理有待进一步研究 定性能力差 发光反应必须满足以下条件1. 化学反应必须产生足够的化学能化学发光基于化学反应提供足够的能量 A + B → C* +D 产物接受反应能被激发在可见光区观察化学发光，需170~300kJ·mol-1激发能。具有过氧化物中间产物的氧化还原反应可满足要求。化学反应多是在有O3、H2O2等参加的高能反应中。2. 处于激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态 C* → C + h ? 2.2.化学发光效率和发光强度 化学发光效率?CL 化学发光强度 具有高效率的化学发光是生物体中。亦称生物发光。如：萤火虫发光反应的效率几乎接近100%。非生物体的化学发光效率一般不超过1% 化学发光强度 ICL（t）与反应速度、化学发光效率有如下关系 A + B →C* +D A为待测物质，C为发光物质，当反应物B的浓度远远过量于待测物浓度时，B的浓度可认为是常数。因此，发光反应可视为一级反应 2.3.化学发光反应的类型 ——研究和应用的比较广泛的有鲁米诺（Luminol）光泽精、没食子酸、洛粉碱、过氧草酸盐等。 鲁米诺是最常用的发光试剂，它可以测定Cl2、I2、HOCl、OCl-、H2O2、O2和NO2，产生化学发光反应时量子效率为0.01~0.05。 鲁米诺（3 –氨基苯二甲酰环肼）在碱性溶液中和H2O2等氧化剂反应生成最大波长为425 nm的光辐射。 鲁米诺与H2O2的化学反应，可以被一些痕量的过渡金属元素所催化，使发出的光大大增强，由此可测定Co（Ⅱ）,Cu（Ⅱ）, Ni（Ⅱ）, Cr（Ⅲ），Fe（Ⅱ Ⅲ ），Ag（Ⅰ），Au（Ⅲ ），Mn (Ⅱ) ，Hg（Ⅱ ）Os（Ⅲ ⅣⅤ），Ru（Ⅵ），V（Ⅳ），Ir（Ⅳ）等金属离子，检测限由0.01~40 ?g·mL-1不等 利用鲁米诺发光体系可以测定50余种元素和大量有机和无机化合物，灵敏度都比较高。 鲁米诺化学发光体系还可用于许多生化反应研究，常常涉及到H2O2的产生或H2O2参加反应。 ——广泛应用于大气污染监测、可监测空气中的O3；NO；NO2；SO2；H2S；CO；乙烯等。 在气相中O3能氧化NO、乙烯等产生化学发光，原子氧也能氧化NO、SO2、CO等产生化学发光 例： NO + O3 → NO2* + O2 NO2* → NO2 +h? （?≥600nm） 常温下产生化学发光，灵敏度可达1ng·mL-1测定范围0.01~10000 ?g·mL-1 CO + O（原子氧） →CO2* CO2* → CO2 +h? （?=300~500nm） 灵敏度为1ng·mL-1 2.4.化学发光分析仪器 ——是一种在静态下测量发光信号的装置，它利用移液管或注射器取一定量的试剂与试样加入发光反应池中混合，化学发光反应立即发生，发光信号通过光电倍增管检测，记录下发光强度。根据发光峰面积的积分值或峰高进行定量分析。 仪器具有设备简单，造价低，体积小，灵敏度高等优点。 缺点：手工进样重复性差，测定精密度不高；难以实现自动化，分析效率低。 * 第六讲化学发光分析法 秋 夕 杜牧 银烛秋光冷画屏， 轻罗小扇扑流萤。 天阶夜色凉如水， 坐看牵牛织女星。 基态 激发态 化学反应 化学发光是由化学反应提供的能量激发物质所产生的光辐射。生物发光是指产生于生物体系中的化学发光。基于这类发光现象的分析方法，称为化学发光（或生物发光）分析法。