DNA的粗提取与鉴定(学案).docVIP

高二年级生物科导学案 学案类型： 新授课导学案 材料序号： 编稿教师： 审稿教师： 5.1 DNA的粗提取与鉴定 【学习目标】 （一）知识目标 知识与技能: 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理 过程与方法: 掌握DNA如提取计数，能利用DNA的性质进行实验设计和操作 情感态度与价值观: 通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。 （二）重点和难点：重点: DNA的粗提取和鉴定方法 难点: DNA的粗提取和鉴定方法 【课前预习】 (一)实验原理： 1．提取DNA的方法 提取生物大分子的基本思路是 。对于DNA的粗提取而言，就是要利用 、 等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 1）DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响。 3）DNA不溶于 ，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 2.DNA的鉴定：DNA遇 （沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 （二）实验设计 1、实验材料的选取 凡是含有 的生物材料都可以考虑，但是使用 的生物组织，成功的可能性更大。 破碎细胞，获取含DNA的滤液 制备和提取细胞核物质：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例。 在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用 搅拌，得到鸡血细胞液。过滤后收集研磨液；如果实验材料是植物细胞，需要先用 溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的 和食盐，进行充分的搅拌和研磨。过滤后收集研磨液。 思考：①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ ②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ ③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? ④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 2）溶解细胞核的DNA： 向收集的滤液中加入 的溶液，搅拌使DNA呈溶解状态。 3、去除滤液中的杂质 方案一的原理是DNA在不同浓度 溶液中溶解度不同； 方案二的原理是蛋白酶分解 ，但不分解 ； 方案三的原理是 和 的变性温度不同。 思考：①为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ ②方案二与方案三的原理有什么不同？ 4、DNA的析出与鉴定 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积 、冷却的 ，静置 ，溶液中会出现 ，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒 搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为 的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的 。混合均匀后，将试管置于 中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变 。 【课内探究】以鸡血细胞DNA的提取和鉴定为例 1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的柠檬酸钠溶液，离心处理； 2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤； 讨论1：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？ 3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态； 4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌； 讨论2：此时加入蒸馏水的目的是什么？