第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件培训讲学.pptVIP

1、免疫测定技术 2、免疫组化技术 按测定用途划分的类型 第二节 酶联免疫吸附试验 一、ELISA技术的原理与方法 二、 ELISA技术的操作注意要点 ELISA技术的原理与方法 间接法 夹心法 竞争法 间接法 夹心法 竞争法 酶标仪 酶标仪 ELISA技术的操作注意要点 试剂器材 操作环节 合适工作浓度 第三节 荧光抗体技术 一、荧光抗体技术的原理与方法 二、荧光抗体技术的操作注意要点 第一节 免疫标记技术的基本概念 一、免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质 免疫标记与标记免疫 免疫标记技术： 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术 常用的免疫标记物质 类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 常用标记方法 1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法 戊二醛交联法 (一步法） 抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体 酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 戊二醛交联法（二步法） COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 过碘酸盐氧化法 O O O O O O NaIO4 O O OH O O OH OH + NH2抗体 O O O N N 抗体 抗体 H2O N 抗体 NaBH4 Schiff碱 酶-五炭糖环 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度 第三节 荧光标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 常用标记方法 1、荧光素的概念 2、生物标记荧光素的要求 3、常用荧光素标记原理与方法 生物标记荧光素的要求 1、具有与蛋白质共价结合的能力 2、荧光效率高 3、能与背景物质形成鲜明对比 4、不影响蛋白质的生物、免疫活性 5、标记方法安全、简便 6、标记物稳定，易保存 FITC的标记原理与方法 荧光素-N=C=S + NH2-抗体 荧光素-N-C-N-抗体 H S H RB200的标记原理与方法 荧光素-SO3Na + PCl5 荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl 荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体 荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析 2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义 第四节 放射性核素标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 常用标记方法 1、常用放射性核素 2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法） 直接法（氯胺T法） OH