抗寒鉴定实验方案.docVIP

油菜抗寒性评价实验方案 （三个方面：与抗寒性相关的性的主要植物学特征特性、生理生化因子、生长发育特性） 种子萌发及苗期 问题提出及目标 关于植物抗寒性的评价，国内外学者已经提出了一大批与抗寒性测定有关的形态指标和生理生化指标(张钢，2005；徐燕等，2007)。由于抗寒性是许多数量或质量遗传基因综合作用累加的结果，每一个与抗寒性有关的性状对植物抗寒性都起一定的作用，但这种作用是微效的。所以，单一指标评价抗寒性具有片面性，用多个指标综合评价植物的抗寒性才较为可靠。 目标：通过对油菜抗寒性的各项指标的试验，选择合适的评价指标建立油菜抗寒性鉴定的综合评价技术规范。 研究提纲 材料：B.rapa 与B.napus各4个材料,分别为超强抗寒性、强抗寒性、抗寒、一般抗寒类型的材料。 试验设计： 研究内容： 植物性特征特性 1.1.1细胞膜透性 1.1.2 叶表皮气孔数 1.1.3气孔大小 1.1.4叶面蒸发强度 1.1.5 叶片厚度 1.1.6 叶表面刺毛状 1.1.7 叶绿素含量 1.1.8 根部性状：根长，根颈直径、根量 生理生化特性 1.2.1 地上部 1.2.2 地下部 生长发育特性 1.3.1地上部 出叶速度、出叶量、干鲜比 1.3.2 地下部 生长量、干鲜比 1.3.3 衰老 二、实验假设与理论依据 发芽指数 萌芽率 相对电导率 游离脯氨酸含量 可溶性糖含量 丙二醛含量 超氧物歧化酶（SOD）活性 过氧化氢酶（CAT）活性 过氧化物酶（POD）活性及同工酶分析等都可作为植物抗寒性检测指标，本实验旨在通过严格控制各项试验影响因素，从中找出几项更稳定指标，并运用数学方法确立一个反应抗寒性的量（综合抗寒指数）来建立油菜抗寒鉴定评价规范。 三 抗寒筛选试验方案简述 1选取全国有代表性的油菜种子，进行种子萌发实验，依次20℃， 15℃ ，10℃，7℃， 5℃，3℃，1℃低温处理，以25℃为对照(CK)。降温速度为1℃/h。到温度点后保温进行萌发，定期取样，随着处理温度的降低，萌芽率会逐渐降低。假设经在3℃低温处理后．大部分种源的萌芽率明显下降，且种源间差异较大；即以3℃低温处理后的各种相对萌芽率作为抗寒性的衡量指标。 2 抗寒指标的选取 根据相关性分析的结果，取极显著或显著相关的指标建立油菜种源抗寒性的评价体系。 3抗寒综台评价体系的建立 不同指标进行主成分分析，一般认为如果主成分分析中所提取主成分的特征值有70％以上的贡献率，就可以用这个或几个主成分对事物的属性进行概括性分析，基本可以得出影响事物性质的主要因素。由此可以得到对抗寒性影响最大的指标 ？ 。 4 建立“综合抗寒指数”评价法 由于各指标的性质、单位和数量不同，故需要对这些指标进行标准数量化。各指标变化具有连续性质．故采用连续性质的隶属度函数，据加乘法则：I=W x F(x) 其中：W为抗寒性指标的权重向量；F(x)为各指标的隶属度值)，对各指标进行合成，计算各种源的抗寒性综合指数。根据综合指数的大小，即可知各品种抗寒性强弱的排序。 l 材料与方法 1 .1 试验材料 供试品种为 （甘肃农业大学提供）。种子无病虫害无破损，本批试验种子千粒重为 g ， 长轴长 c m， 短轴长 c m。 清水选种：晴天或天气干燥时，在容器内放足水，倒人种子进行搅拌，之后捞去浮在上面的轻种、杂质，最后捞出下沉的种子晾干。操作时动作要迅速，以免病原物因长时间浸水而下沉，从而影响水选效果。 种子用清水浸12h ，冲洗3次，杀菌剂处理(0 .1％的高锰酸钾溶液中浸泡3 0-6 0 min，清水冲洗 3次。每处理挑选 100粒饱满种子试验，6次重复．将种子均匀排列在垫有 2层滤纸的培育皿中，加盖一层薄的纸巾，加入适量蒸馏水，盖上培养皿盖，暗光发芽，定期喷水。 ( 资料光照 1 0 h，黑暗 1 4 h ，温度 ℃） 1.2试验方法 1.2.1 温度筛选试验：I对照 ( C K)，不做低温胁迫处理，温度25℃（室温）：Ⅱ低温胁迫，处理温度梯度依次为20℃，15℃ ，10℃，7℃，5℃，3℃， 1℃。降温速度为1℃ 资料 计算发芽指数G I =∑G t／D t ，G t为在t日的发芽数，Dt为相应的发芽日数。萌芽率 =( 发芽种子数／种子总数) ×100％．。 发芽率( ％) = ( 7 d的种子发芽数／ 供试种子总数) x 1 0 0 ％； 发芽势= ( 3 d的种子发芽数／供试种子总数) x 1 0 0 ％； 1.2.2 正式试验： 做如下处理 ：I对照 ( C K)，不做低温胁迫处理，催芽温度为25℃（室温）：Ⅱ低温胁迫，处理温度3℃（前面筛选结果）梯度降温至3℃，降温速度为1℃/h。降到所需温度维持24 h（关键点）后取样检测:以后每24小时取样一次，（一次/多次？）保