同工酶技术及其在当归研究中的应用.docVIP

第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 12 页 FILENAME seminar 同工酶技术及其在当归研究中的应用 摘要：同工酶是基因表达的直接产物，反映了编码蛋白质的DNA序列信息。利用同工酶分析技术不仅能区分当归品种的同工酶特征，而且能表现当归不同同工酶特征，同时也可利用不同种类和不同品系当归的同工酶谱进行遗传多样性分析，对预防当归早期抽薹、当归种质鉴定、遗传图谱的构建、寻找当归遗传多样性中心地区、筛选优良品种、进行种质改良研究都具有特别重要的意义。 关键词：当归；同工酶技术； 同工酶研究进展； 同工酶分析技术；同工酶的影响因素；应用 1 研究的目的和意义 　当归[Angelica sinensis(Oliv) Diels]为伞型科当归属多年生草本植物,其根是我国常用名贵中材之一,素有“补血圣药”、“妇科要药”之称,具有活血、养血、调经、止痛等作用,传统中药分类归为补血药[1~2]，已有2000多年的药用历史，主产于我国四川、甘肃、陕西、云南、湖北等省。根据产地和药用部位与加工炮制的不同，有当归、西当归、归头、归身、归尾、全当归、油当归、酒当归、炒当归、当归炭等多种名称。且由于当归的药用价值高和应用范围广，因此它是目前难以取代的药用植物之一。 当归是多年生草本，但药材栽培过程中一般为两年。第一年进行营养生长，形成肉质根后休眠；第二年进行生殖生长，抽薹、开花和结实。抽薹开花后，当归根木质化严重，不能入药。由于一年生当归根瘦小，性状差，因此当归生产上采取第一年夏季播种育苗，次年用移栽的方法来延长当归的营养生长期，秋季收获肉质根作药用，但在次年的当归生产田中，常常发现有抽薹、开花、甚至结实的植株，即称为提早抽薹。提早抽薹的植株，致使大量的光合产物供给生殖生长形成生殖体，造成根部不再膨大呈肉质，而是呈柴性，缺乏油气，不能入药。提早抽薹植株，严重时可达50%，甚至50%以上，给生产带来很大损失，严重影响了当归产量和药用价值。因此，只有对当归早期抽薹的外部原因和内部机理进行深入研究，才能取得有效措施克服当归早期抽薹，进而提高当归的产量。 另一方面，按常规育种选育一个品种通常需要 8－10 年的时间，甚至更长。这对尽快培育优良品种是不利的。在育种工作中，如果能促进当归早期抽薹开花，可大大缩短育种年限，减少种子贮存等一系列繁琐的工作，对推进育种工作的进程是十分有利的。因此，探索促进当归早期抽薹的手段显得尤为迫切。 因此，当归早期抽薹的“促”和“控”一直是人们研究和关注的焦点。研究当归早期抽薹和外源调控（温光诱导、激素调控）的关系有很大的学术价值，利用同工酶谱阐明当归早期抽薹的内部机理，为人工化学调控提供理论依据。在栽培上对合理确定播期，激素调节，从而降低当归早期抽薹率，提高当归产量具有广泛的应用前景；在育种中，促进当归及早的抽薹开花，可以大大缩短育种年限；同时，阐明同工酶谱在不同的诱导条件下表达的差异，揭示当归早期抽薹的环境诱导机制，从而指导生产培育出抗抽薹品种，更加具有实际意义。 1 同工酶技术 同工酶是蛋白质的一种特殊类型，是指来源相同，催化性质相同而分子结构不同的酶蛋白分子。同工酶是生物界广泛存在的一种普遍现象，存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织,甚至同一组织、同一细胞中，是生物体在长期进化过程中对机体内复杂代谢方式的一种反应，具有重要的生物学意义。 同工酶是基因表达的产物，反映了编码蛋白质的DNA序列信息。它是由于生物在进化过程中适应细胞代谢的多方面要求而形成的，特异的基因表达产生特异的同工酶酶谱。同工酶结构的相似性反映了生物间的亲缘关系，用电泳方法将不同的同工酶分开，通过特异性染色将其位置和活性直接在染色区带上以酶谱的形式标记出来，再通过比较不同个体间同工酶谱带的差异性，可以研究个体间的系统关系。同工酶分析还可以作为一种有效的手段从蛋白质水平上鉴别许多从外部形态上难以鉴别的遗传变异。同时同工酶实验的数据处理方法较为规范，因此，同工酶的分析方法是现代遗传学研究的一个有力工具。许多研究工作者对作物如玉米、番茄、水稻、甘蔗、辣椒中品种间的亲缘关系和品种的起源通过同工酶分析作了广泛深入的探讨，并探讨了在作物遗传育种上的应用。 1.1同工酶研究进展 1957年，Hunter和Markert将蛋白质淀粉凝胶电泳技术与组织化学染色技术结合起来，创立了蛋白质(同工酶)电泳酶谱分析方法。随后，Market和Moller在1959年用此法发现了乳酸脱氢酶(LDH)具有多种形式，导致了同工酶(Isozyme)概念的产生:生物有机体常常产生酶的多种形式，即催化同一反应的不同分子形式。从电泳酶谱角度讲，就是在凝胶上所看到的一组酶带，它们是催化在同一反应的，在电场中迁移性质稍有不同的酶的多种形式。但当时并不知道它们的遗传学基础。 196