生物工程下游技术第八章色谱分离技术.ppt

（3）硅胶的活化 活化硅胶常采用硅烷化试剂，如γ-氨丙基三甲（乙）氧硅烷和环氧丙基三甲基硅烷等，反应为： 引入活性氨基或环氧基后，在酸性溶液中环氧基可发生二醇化反应： （四）间隔臂 当配基较小时，将其直接固定在载体上，会由于载体的空间位阻，配基大分子不能发生有效的亲和吸附作用。 这时，需要在配基 与载体之间连接一 个“间隔臂”，使其发 生有效的亲和结合。 间隔臂的作用 间隔臂应满足以下条件： 发生作用的活性位点必须位于配基分子的内部，并且不能影响配基与目标产物结合；长度适当，不能过短，否则难以和配基有效结合，不能太长，以免自身某些基团发生相互作用，同时结合能力下降；必须在某种特定的分离条件下能被洗脱 （五）封闭 活化结束后有少部分活化基团未被配基偶联，需要将其封闭。 可加入过量的能与活化剂反应的试剂封闭多余的活化基团，或水解活化基团。 五、亲和色谱法的操作过程 1.配基固相化（样品制备、装柱、平衡） 2.亲和吸附 3.解吸附 4.色谱柱再生 1.配基固定化。将与纯化对象有专一结合作用的物质，连接在水不溶性载体上，制成亲和吸附剂后装柱（称亲和柱）。 2.亲和吸附（进料和杂质清洗）。将含有纯化对象的混合物通过亲和柱，纯化对象吸附在柱上，其他物质流出色谱柱。 3.解吸附（目标产物洗脱）。用某种缓冲液或溶液通过亲和柱，把吸附在亲和柱上的欲纯化物质洗脱