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现代材料测试方法与分析 张兴华 zhangxinghua@hebut.edu.cn Tel: QQ: 371932704 荧光分光光度法 Fluorescence Spectrophotometry 前言： • 1852年，斯托克斯（Stokes）发现了萤石 在暗处受到光的照射时，会发出一种蓝白 色的光，他把这种光命名为“萤光”。 • 1868年，Goppelstroeder 发表了利用Al- 桑色素的绿色荧光来分析微量Al 的分析方 法，可见荧光分析法是一种历史悠久的分 析方法。 时至今日，荧光分析在方法上取得了极 大的进展。 促进了诸如：时间分辨、相分辨、荧光 偏振、荧光免疫和同步荧光等荧光分析新 方法的发展，同时促使各种各样新型荧光 分析仪器的出现。 在仪器方面，微机控制的全自动荧光分 析仪具有灵敏度高（比紫外-可见分光光度 法高2 - 3个数量级）、选择性好、工作曲线 线性范围宽且能提供激发光谱、发射光谱、 发光强度、发光寿命、量子产率、偏振和各 向异性诸多信息等优点，已成为一种重要的 痕量分析技术。 在生物、医药、环境和石油工业等诸多 领域，荧光分析法都有广泛的应用。不仅能 直接或间接地分析众多的有机化合物，而且 还能利用与有机试剂间的反应进行许多无机 元素的测定。 随着科技的发展进步，荧光这种光致 发光（photoluminescence ）的本质被进一步 揭开。 • 物质除了受紫外-可见光照射后会发出紫外 和可见（UV-Vis ）荧光之外，受其它各种不 同波长光的照射之后，同样也有发光现象。 例如：X-荧光、红外荧光等。 • 除了吸收光能使分子受激发而发光，根据起 始激发形成的方式，可以将荧光同其它的发光 类型（例如：生物发光、热发光、化学发光和 摩擦发光）区别开来。 • 通过化学反应使分子受激而发光称为“化学 发光”。利用化学发光进行分析工作叫“化学 发光分析”。 •化学发光分析、荧光分析和磷光分析统称为 “分子发光分析(molecular luminescence)”。 光致发光 （Photoluminescence ）: 荧光和磷光是分子 吸光成为激发态分子，在返回基态时的发光现象，称 为光致发光。 特点： ★灵敏度高。检测限比吸收光谱法低1~3个数量级； ★线性范围宽； ★选择性比吸收光谱法好。因为能产生紫外可见吸收 的分子不一定发射荧光或磷光； ★应用范围不如吸收光谱法广，因为有的分子不发荧 光。 基于化合物的荧光测量而建立起来的分析方法称为分 子荧光光谱法。 荧光光谱法基本原理 • 分子的激发与失活 • 1. 分子的多重态 • 单重态 一个所有电子自旋都配对 的分子的电子状态。大多数有机 物分子的基态是单重态。当基态 一对电子中的一个被激发到较高 能级，其自旋方向不会立刻改变 ，分子仍处于单重态。 • 三重态 有两个电子的自旋不配对 而平行的状态。激发三重态能量 较激发单重态低。 2. 激发态分子的失活: 激发态分子不稳定，它要以辐射 或无辐射跃迁的方式回到基态。 无辐射跃迁 ☆振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级 转至较低振动能级的过程，其效率较高。 ☆内转换：相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级回 到低能级的分子内过程。 ☆系间窜越： 激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多 重态发生变化的过程。 ☆外转换：激发态分子与溶剂与其他溶质相互作用、能量转 换而使荧光 （或磷光）减弱甚至消失的过程。荧光强度的 减弱或消失，称为荧光熄灭（或猝灭）。 辐射跃迁: 荧光：受光激发的分子从第一激发单重态的最低振 动能级回到基态所发出的辐射。寿命为10-8 ~ 10 -11s 。 由于是相同多重态之间的跃迁，几率较大，速度大， 6 9 -1 速率常数k 为10 ~10 s 。 f 磷光：从第一激发三