第七章抗体工程制药.ppt

抗体在体外人源化存在的问题 操作过程复杂 需付出昂贵的代价 抗体的亲和力降低 抗体不是人体免疫系统天然产生 异源抗体与免疫系统的配合 最理想的单克隆抗体 100%人源 人类免疫系统自然产生 全人抗体的理论基础 癌症细胞、病毒、细菌对人机体而言均为异己物 人体不断受异己物攻击，但免疫系统通常有清除能力 免疫系统通过体液免疫和细胞免疫对异己物做出反应 体液免疫就是针对异己物天然地产生抗体 全人抗体面临的关键问题 持续分泌抗体的人 B细胞 抗体分泌细胞的保持 30年来的全人抗体的尝试 鼠骨髓瘤不适合与人B细胞融合 -稳定性差 -抗体产量低 非洲淋巴细胞瘤病毒 (EBV) 保存抗体分泌细胞 -细胞株不稳定 -抗体的产量低 -不能特异性地保存抗体分泌细胞 很难获得人类骨髓瘤细胞株 全人抗体技术的最新突破 成功建立人骨髓瘤细胞系，人源抗体的研究进入新的里程 用途：能稳定的保持人B细胞分泌抗体的能力 发明人：英国剑桥大学的Dr.Karpas教授 意义： 1 在整体水平上研究人类产生的抗体 2 开创人类抗体基因组学的研究 评价： 诺贝尔奖得主Dr.Milstein 推荐发表 在PNAS，世界权威杂志“科学”发表了 新闻评述，剑桥大学开了新闻发布会 人－人杂交瘤技术 开发针对未知抗原的全人治疗用抗体的唯一技术 分离、保存稳定分泌天然抗体的B细胞先进方法。 寻找新型肿瘤相关抗原的捷径 人－人杂交瘤技术的优势 （1）迅速高效的生产天然人类单克隆抗体 抗原选定和抗体产生都由人类免疫系统完成， 不会引起自身免疫反应，与人体免疫系统配合良好 能获得最佳亲和力和中和活性的抗体 更合理的自然选择药物设计方式 加速抗原的发现和抗体的开发过程 人－人杂交瘤技术的优势 （2）简便、低费用的抗原抗体研究生产方式 与其他抗体改良技术相比操作更简便 起始抗体分泌水平较高，可直接用于工业规模生产 避免了改良技术引起的抗体失活 无需发现抗原和对抗原进行功能确定 人－人杂交瘤技术的优势 （3）唯一研究全人抗体图谱的技术。 确定人类免疫识别系统，确定人类免疫系统在不同的生理、病理以及发育条件下得到的抗体图谱。 （4）研究癌症免疫学和抗原基因组的最新技术。 寻找人类癌症抗原，将找到的抗原作为癌症疫苗和抗体药物开发的靶标。 人－人杂交瘤技术的优势 （5）开发针对已知抗原的第二代全人抗体产品，如HERE-2/neu, TNF,以及感染性疾病如乙型肝炎病毒, HCV和HIV （6）与其他细胞融合，产生杂交瘤，制造其他有用的人类蛋白质。 未来单抗开发的完美方案 从已知治疗靶子生产高亲和力全人抗体 全人抗体挑战靶分子的筛选 开发未知抗原的治疗用抗体 人-人杂交瘤技术的应用 1.癌症： 抗肝癌单克隆抗体 抗乳腺癌单克隆抗体 抗肺癌单克隆抗体 抗结肠癌单克隆抗体 2.病毒性疾病： 乙型肝炎病毒单克隆抗体 丙型肝炎病毒单克隆抗体 艾滋病病毒单克隆抗体 治疗乳腺癌曲妥珠单抗药物 我国第一个基因重组人源化单克隆抗体药物－泰欣生（尼妥珠单抗） 治疗直肠、结肠癌的贝伐单抗 瑞士罗氏生产的安维汀 需要整合的技术平台 蛋白组学 蛋白芯片、2维-电泳技术 免疫组学 组织信息学 细胞阵列技术 组织微阵列技术 人－人杂交瘤 人-人杂交瘤与肿瘤相关抗原 癌症免疫组学 癌症患者免疫反应的全过程 癌症抗原和抗体库 SEREX 重组cDNA表达文库血清分析 确定可能作为癌症疫苗的靶抗原 确定能够作为抗体靶向的抗原 经典方法认识的肿瘤相关抗原再认证 HERE-2/neu, CEA, AFP (甲胎球蛋白), MAGE, P53，CA125…… 肿瘤相关抗原制备的单克隆抗体的应用 基因组、蛋白质组和抗体组 基因组 蛋白质组 抗体组 50,000 10 to 20 million 100 millions genes distinct proteins antibodies Antibodomics Proteomics Genomics 思考题: 单克隆抗体的定义和它的不足 基因工程抗体有那些类型 如何制备杂交瘤细胞 * * 　　克隆鼠单抗的可变区基因，可从基因组文库中分离，也可用PCR技术分离。 　人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变来修饰调整其效应。 　　人一鼠嵌合抗体与鼠单抗相比，免疫原性大大降低，利于在人体内应用，所以目前已制备出上百种抗各种抗原(包括肿瘤相关抗原)的嵌合