药物分析_第9章_甾体激素类药物的分析报告.pptVIP

Kober反应缺点： （1）条件较难控制，易出双色→黄+红 （2）重现性较差： ① 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反应时间和温度的影响。 ② 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定剂，赋形剂,溶剂对测定有干扰。 515 第二步反应 465 450 500 550nm A Kober 反应吸收光谱 第一步反应 采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量 中国药典 含量测定 特点 用样量少，灵敏度高，分离效果好，快速 RP－HPLC 各国药典常采用 可消除其他甾体的干扰 《中国药典》2005年版 内标法 + 校正因子 填充剂 C18 流动相 甲醇-水（70：30） 醋酸地塞米松内标 甲睾酮 炔雌醇内标 醋酸甲地孕酮 黄体酮内标 己烯雌酚 丙酸睾酮及其注射液 内标 苯丙酸诺龙 醋酸地塞米松片 UV法 皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 △４-3-酮 240nm（±） 苯环 280nm（±） 雌激素 醋酸地塞米松注射液 四氮唑比色法 常用的四氮唑盐 I. 氯化三苯四氮唑（TTC） 也称红四氮唑（RT） 深红↓ II. 蓝四氮唑（BT） 暗蓝 √ 皮质激素C17- ? -醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能 将四氮唑盐定量地 还原为有色甲瓒。 1、原理 三苯甲瓒 氯化三苯四氮唑 （TTC） [H] ↓深红 2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride Red tatrazoline RT (Formazan) 对照品法 2、测定方法 40～45′ 暗 3、测定条件 （1）基团影响： 一般认为：C11上的酮基反应速度快于C11位上的羟基，C21上的羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯时，反应速度更慢。 （2）O2与光线 O2敏感 → 充N2 光敏感 → 避光、快速 反应过程 反应产物 ChP 充N2、暗处、快速 含水量＞5% → v↓ 醛（还原性）→ A↑ 含水10% → A↓10% 含水30% → 几无反应 （3）溶剂与水 无醛 乙醇 无水 （4）碱的种类及加入顺序 皮质激素与碱长时间接触会发生副反 应，故应先加四氮唑盐后再加入碱液 供试液 ＋ 四氮唑盐 ＋ 碱试液 氢氧化四甲基铵 （pH13.75） （5）温度与时间 t℃↑ ChP 25℃~30 ℃ 40′～ 1h BP 30℃ 1h → v↑ → 甲臜分解↑ → %↓ 知识回顾Knowledge Review 甾体激素类 药物鉴别 (1) 呈色反应 A.与强酸呈色反应 B.官能团呈色反应 (碱性四氮唑蓝试液、硫酸苯肼、亚硝基铁氰化钠等) (2) 沉淀反应 A.斐林试剂反应 生成Cu2O B.银氨溶液反应生成Ag C. AgNO3溶液反应生成AgCl (3) 衍生化反应 (生成酯、肟、缩氨基脲等) (4) 水解产物反应 (如醋酸可的松用EtOH制KOH及H2SO4使生成醋酸乙酯的香气鉴别) (5) UV法 (6) IR法 (7) TLC法 (8) HPLC法 炔雌醇 和黄体酮 IR(p.249～250) 制衍生物测熔点 ◆与硫酸的呈色反应 橙红 黄绿荧光 絮状↓玫瑰红 H2O 甾体激素母核能与H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等强酸呈色。 最常用的是H2SO4。 炔雌醇 IR 3300～3000cm-1 1900～1650cm-1 3750～3300cm-1 ν 衍生化反应 炔雌醇 m.p.201℃ 黄体酮 双肟m.p.238℃ 官能团呈色反应 (1). C17-?-醇酮基的呈色反应：具还原性、能与氧化剂碱性酒石酸铜试液、氨制硝酸银试液、碱性四氮唑试液反应而呈色。 (2). 酮基的呈色反应：C3-酮基和C20-酮基均能与异烟肼、2,4-二硝基苯 肼、硫酸苯肼等羰基试剂呈色。 (3). 甲酮基的反应：亚硝基铁氰化钠反应是黄体酮类专属鉴别方法， 在一定条件下，黄体酮显蓝紫色，其他常用甾体激素不显色或显淡橙色。 (6). 有机氟的呈色反应：含氟药物破坏后，与茜素氟蓝及硝酸亚铈起 呈色反应。 (4). 酚羟基的呈色反应：雌激素类C3位酚羟基与重氮苯磺酸反应生成红色偶氮染料 （5）炔基的沉