生殖细胞培养二.pptVIP

* Feeder Cell: 未成熟胚悬浮细胞或小孢子细胞 Feeder Cell促进被饲养物生长的原因： 1）增加细胞密度 2）细胞旺盛分裂或分化过程中产生活性物质 ——生长促进因子(GPF) （维持细胞分裂、生长和发育所必需的） * 从离体受精到植株开花约需100天，形成的籽粒具有正常发育的胚和胚乳。 离体融合产生的合子培养获得再生可育植株是在玉米中实现的。 * * (三）离体受精的研究意义 1.用于遗传育种中可以克服自交不亲和性，进行作物改良。 2.?为受精生物学的重要理论问题的探索与解决开辟了新的途径； * 离体受精的细胞学研究现状 1. 配子识别——判别糖蛋白的作用 利用分离的雌、雄配子对其细胞膜特征，如表面膜蛋白 特别是糖蛋白的分布等直接进行分析，这可以帮助判断 糖蛋白在被子植物中是否和在动物及低等植物中一样是 配子识别必不可少的； 2. 膜融合——多精入卵问题的探讨 3. 胞质融合——精细胞质全部进入卵细胞 4. 核融合——融合过程中的信号问题 * 离体受精的细胞学研究现状 1. 配子识别——判别糖蛋白的作用 2. 膜融合——多精入卵问题的探讨 膜融合的方式，在不同的离体受精系统中融合的原理是 不同的，一种是精细胞质很快进入卵细胞，精细胞膜作 为其中的一部分参与了受精卵细胞膜的重组。另一种是 精细胞整体进入卵细胞，精细胞膜并不参与融合产物细 胞膜的形成。 3. 胞质融合——精细胞质全部进入卵细胞 4. 核融合——融合过程中的信号问题 * 离体受精的细胞学研究现状 1. 配子识别——判别糖蛋白的作用 2. 膜融合——多精入卵问题的探讨 3. 胞质融合——精细胞质全部进入卵细胞 体内自然受精过程中，至少部分被子植物的精细胞质未 能进入卵细胞；而在离体受精时，精细胞质则全部进入 卵细胞 。 4. 核融合——融合过程中的信号问题 * 离体受精的细胞学研究现状 1. 配子识别——判别糖蛋白的作用 2. 膜融合——多精入卵问题的探讨 3. 胞质融合——精细胞质全部进入卵细胞 4. 核融合——融合过程中的信号问题 核融合一般在精—卵融合后35-90min出现 。烟草卵细胞 有明显的极性即液泡端和胞质端，但无论精子在卵细胞 哪一端融合，卵细胞质都可很快地移向精核处将其纳入 并包被。 * IVF的研究意义 1. 为受精生物学的重要理论问题的探索与解决开辟了新的途径； 2.?用于遗传育种中可以克服自交不亲和性，进行作物改良。 离体受精所能克服的是那些以花粉—柱头或花粉—花柱相互作用为基础的不亲和障碍，并不是万能的。 * 当前热点问题 利用离体受精系统研究受精与早期胚胎发生过程中的基因表达，是本领域研究由细胞水平进入分子水平的新趋势，主要工作是 1. 构建DNA文库研究基因表达； 2. 利用显微注射技术（Microinjection）来将外源基因导入卵和合子的实验。 * 1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6hr。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼苗。 * 未成熟子房——70%酒精浸数S——0.1%升汞或饱和漂白粉浸10-30min——无菌水冲洗——剖出胚珠——取出完整胚——接种在培养基上。 幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养不易成功。 * 为了获得六倍体小麦，用四倍体小麦去雄，以Aegilops山羊草属植物授粉，获得杂种胚，通过人工胚的培养获得三倍体的杂种胚植株，对杂种胚植株进行秋水仙素加倍处理，获得纯合六倍体小麦。 * * 果树多倍体一般具有生长旺盛、 果实大且少籽或无籽、 产量高、 适应性和抗逆性强等特点，且能够利用无性繁殖的方式固定其优良性状， 使之保持稳定而不分离， 在生产上长期利用。 三倍体生物与其他多倍体相比，其营养生长通常是最好的。一般说来， 三倍体具有两大基本特征：由体细胞增大所引起的巨大性和由减数分裂过程紊乱造成的不育性，再加上多种不同生物类型和品种的三倍体所具有的特殊可贵性状，常引起育种工作者的关注。另外,大多数的三倍体对外界环境条件具有较强的适应性， 有抗旱、 抗病、 抗寒等特性。 枝条变粗， 叶片变宽变厚、 叶色浓绿， 叶绿体数目增加， 气孔变大但密