HPLC法测定男宝胶囊中阿魏酸的含量.docVIP

HPLC法测定男宝胶囊中阿魏酸的含量 鲍恩泉（巢湖市药品检验所，巢湖，238000） 摘要： 目的 建立测定男宝胶囊中阿魏酸含量的高效液相色谱法。方法 采用色谱柱：Agela Technologies C18柱（4.6mm×250，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸溶液（17：83）为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长：316nm；进样量20μl；柱温：35℃；结果 阿魏酸在4.2~21.3μg.ml-1(r=0.99998)范围内线性关系良好。结论 实验表明，该方法准确、可靠、重现性好，可用于测定 关键词：男宝胶囊；阿魏酸；HPLC法 男宝胶囊主要用于肾阳不足引起的性欲淡漠，阳痿滑泄，腰腿酸痛，肾囊湿冷，精神萎靡，食欲不振等症。主要成份[1]有鹿茸、海马、阿胶、牡丹皮、黄芪、驴肾、狗肾、人参、当归、杜仲等多味药材。收载于卫生部药品标准中药成方制剂第19册。该品种的质量标准只对当归做定性鉴别，没有收载含量测定项。为了进一步提高该品种的质量可控性，我们建立了利用HPLC法测定男宝胶囊中阿魏酸的含量测定。 供试样 男宝胶囊（生产单位，吉林省利华制药有限公司，批号20080304； 实验仪器与试药 高效液相色谱仪：agilent 1200全自动进样系统；紫外检测器；梅特勒-托利多AL204电子天平；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611）；乙腈为进口色谱纯，其他试剂均为分析纯。 实验方法与结果 3.1 色谱条件[2] 色谱柱：Agela Technologies C18柱（4.6mm×250，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸溶液（17:83）为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长：316nm；进样量20μl；柱温：35℃； 3.2 溶液制备 对照品溶液制备：取阿魏酸对照品21.26mg置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。作为母液。 样品溶液制备：取吉林省利华制药有限公司生产的男宝胶囊的细粉，研匀，精密称取适量（见下表），置100ml具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量。加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，静置。滤过，滤液置蒸发皿中，置70℃[3]以下水浴上蒸干，残渣加水50ml使溶解，用稀盐酸调pH至1-2[4],用乙醚振摇[5]提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液置蒸发皿中，蒸发发皿于通风橱中挥干乙醚。用70%甲醇4ml分三次（2ml、1ml、1ml）洗涤蒸发皿，并移至5ml棕色量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。 空白溶液 70%甲醇。 4 阿魏酸线性关系考察 4.1 空白溶剂及其他成份峰干扰试验 分别取“3.2”项下的阿魏酸对照品溶液、样品溶液、空白溶液，分别取溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。阿魏酸对照品峰的保留时间为13.646min,供试品溶液在13.775min有吸收峰，此峰与其他杂质峰分离良好，空白溶液在13.6min左右无吸收峰。说明空白溶液及样品中其他成份峰对阿魏酸峰的测定无干扰，见表1。 表1：对照品溶液、供试品溶液及空白溶液峰保留时间 对照品溶液吸收峰 供试品溶液吸收峰 空白溶液 13.6min左右峰保留时间 13.646min 13.775min 无吸收峰 液相图谱 附2页 附21页 附1页 4.2 线性关系考察 精密量取“3.2”项下对照品溶液的母液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置10ml棕色量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别取20μl注入色谱仪，记录峰面积，以峰面积为峰面积A，样品品浓度C（μg/ml）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：见表2 A=104.13C-0.7950(r=0.99998) 结果表明：进样浓度在4.25~21.26μg/ ml范围内线性关系良好。 表2：阿魏酸对照品线性关系 序 号 1 2 3 4 5 量取母液量（ml） 1 2 3 4 5 样品浓度(μg/ml) 4.252 8.504 12.756 17.008 21.26 峰 面 积 442.243 888.452 1323.327 1766.548 2217.065 图谱编号 附7页 附8页 附9页 附10页 附11页 4.3 精密度试验 取取“4.2”项下序号3的阿魏酸对照品溶液，重复进样5针，每次20μl，测定峰面积，结果RSD为0.89%（n=5），表明精密度良好。实验数据见表3 表3：精密度试验 序 号 1 2 3 4 5 RSD 峰 面 积 1326.425 1322.