从四例丙肝患者系列血清标本分析HCV基因的变异.docVIP

???? 从四例丙肝患者系列血清标本分析HCV基因的变异 ???? ????【 摘要 】　目的　研究丙型肝炎病人系列血清标本的丙型肝炎病毒（HCV）基因型变化及HCV膜区基因变异和“准种”现象。 方法　对4例因献血感染HCV病人的系列血标本，用特异性引物PCR扩增检测，5′-NCR和核心区测序确定HCV基因型，并对标本膜区基因进行克隆，每个标本随机选择5～9个克隆进行测序分析。 结果　发现随着时间推移，存在HCV基因型的转换现象。在2种HCV基因型转换期存在混合感染。所有测定序列均为1b或2a或1b+2a基因型。对从部分血样中获得的5～9个克隆测序表明，在不同克隆间虽然存在一定的核苷酸差异，但在570nt长度的序列中，仅有0.8～4.56个核苷酸差异。 结论　HCV基因变化是多层次的。同一病人可混合感染不同基因型HCV，HCV膜区基因有随时间而发生变异现象。但在本研究的标本中，通过对同一标本基因多个克隆的序列测定，未见明显的“准种”现象。　　【 主题词 】　丙型肝炎病毒； 基因型； 膜区基因 Study on HCV gene variation ZHANG Shumin, ZHUANG Hui, LI Hemin, et al.(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing 100050, P. R. China) 　　【 Abstract 】　Objective　To study the HCV genotype change in the serial sera of patients with hepatitis C, HCV gene variation and quasi-species. Methods　Serial sera of four patients with hepatitis C were collected from 1994 to 1997. HCV genotyping, direct sequencing and multiple-clone sequencing were performed. Results　The genotype change was found with time in 3 patients. During the switching period of two genotypes, 2 patients had a co-infection of 1b and 2a for short period. All the tested samples were 1b, 2a or 1b+2a. Five to nine clones obtained from the same serum were sequenced. Although some nucleotide variation was found in different clones, only 0.8-4.56 of 570 nucleotides were different. Conclusions　Co-infection of different HCV subtypes may occur in the same patient. HCV envelope gene of the subtype changes with time. No obvious quasi-species phenomenon was found in the patients with hepatitis C. HCV gene variability exists at different levels.　　【 Subject words 】　HCV; Genotype; Envelope gene region 　　 丙型肝炎病毒(HCV)是一正链RNA病毒，属于黄病毒科，基因的多变性是其重要特征。HCV基因变异主要表现在四方面：即基因型、亚型、准种和不同毒株〔1〕。目前，世界范围内的HCV株主要分为六大型，型之下又分不同亚型。型别的分布与地域有很大关系〔1〕。我国主要以2a和1b型为主。在HCV基因结构中, 膜区是变化最大的区域，尤其是位于E2区5′端的HVR区变化最大，推测该区是与HCV疫苗研制有关的主要区域。“准种”是HCV变异的另一个重要特点。“准种”是指在病人体内一群同源性较大的病毒株的总和〔2〕，推测HCV的慢性化是由于“准种”逃避宿主的免疫压力，此消彼长的结果。但也有不同看法，认为病人体内 “准种”可能是由于实验误差造成的〔3〕。为研究HCV基因型别在个体内随