动物遗传学第十一章动物基因工程.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第七节 转基因动物技术 一、转基因动物技术的概念 动物转基因技术：将外源DNA导入性细胞或胚胎细胞，并产生出带有外源DNA片段动物的一种技术。 1981年，Gordon和Ruddle首次用显微注射法把外源基因导入小鼠受精雄核。 二、转基因动物技术的一般步骤 选择能有效表达的蛋白质； 克隆与分离编码这些蛋白质的基因； 选择能与所需组织特异性表达方式相适应的基因调控序列； 把调节序列和结构基因重组拼接，并在培养细胞中预先检验其表达情况； 把拼接的基因引入到受精卵的细胞核中； 把引入后的受精卵移植到子宫，完成胚胎发育； 检测幼畜外源基因的整合、表达以及在后代中的传递情况。 三、?导入基因的方法 (一) 显微注射法? (二) 精子载体法 精子载体法：是将成熟的精子与外源DNA的载体共同孵育，使精子携带外源DNA，受精后外源DNA整合至染色体中。 影响因素：①精子吸附外源DNA需特定的时期； ②精子吸附DNA时，精子的活性；③DNA的性质。 (三) 胚胎干细胞介导法 胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES)：是从胚泡内细胞团取出，在体外培养建立的，保持正常核型的多潜能细胞。 (四) 染色体片段显微注入法 染色体介导法：是指从人或动物染色体上割取特定的染色体片段(M期)或分离出来之后，以其为媒介将外源基因注入动物早期胚胎中，以获得外源DNA的动物。 特点：成果率很低(0～0.002%)；可转移超大型外源DNA(＞1000kb)。 四、转基因动物检测的方法 DNA的提取 斑点杂交和PCR扩增 Southern杂交 Northern杂交 表达产物的检测 五、基因的选择与转基因动物的研究现状 (一) 转入基因的选择 与机体代谢调节有关的蛋白基因，如生长激素基因等； 抗性基因，如抗逆、抗病等； 经济性状的主效基因，如猪和绵羊的高繁殖力基因等； 治疗人类疾病所需的蛋白质基因。 (二) 转基因动物的研究现状 1、提高动物生长、生产性能的研究 2、改变奶蛋白成分和性质的设想  提高K酪蛋白的含量 引入人奶蛋白 3、利用家畜生产药物蛋白的研究 人的血红蛋白基因转入猪(3000$/头) 人体清蛋白转入山羊(20000～25000$/头) 六、转基因动物的应用前景 动物克隆技术 (Animal Cloning Technology) 第八节 ??????????????????????????????????????? 1997年2月22日，英国“Nature”刊登了爱丁堡罗斯林研究所维尔穆特的研究成果，即“多莉”羊的克隆成功，从此震惊了世界。 Creating Dolly！ 多莉的生命历程 1998年4月与威尔士山羊戴维产下邦尼，证明了克隆动物也能生育。 2003.2.14，苏格兰向外界宣布：多莉因早衰并患有肺炎，被迫实施了安乐死。由于早衰问题，人们怀疑“多莉是穿着羔羊服装的老羊” 。 一、动物克隆的概念 克隆(cloning)：即无性繁殖。 动物克隆(animal cloning) ：不经过受精过程而获得动物新个体的方法。 哺乳动物克隆技术：是哺乳动物核移植技术，通过显微操作等实验手段，将发育一定阶段的核供体及相应发育阶段的核受体进行体外重组，通过重组胚的胚胎移植，达到大量生产遗传同质哺乳动物的一种生物工程技术。 二、克隆动物的一般步骤 体细胞的采集和培养； 采集卵细胞并去除卵细胞的细胞核； 取出体细胞的细胞核； 用微注射法注入去除核的卵细胞中去； 将转核胚置入同期母体子宫，完成发育，所产生的动物幼子为克隆动物。 三、影响动物克隆的因素 1、细胞融合的条件 2、细胞发育阶段可对核移植实验产生影响 3、细胞诱导分裂成熟因子(MPF)的活性 4、卵细胞中的大分子物质的影响 四、克隆动物的意义与前景 1、种质保存； 2、生产移植器官、药物和提供实验动物； 3、克隆濒危动物(如大熊猫)； 4、克隆转基因动物； 5、培育优良物种。 基因诊断：就是通过DNA分析技术对引起遗传病的DNA序列或遗传标记的诊断，以揭示遗传病的发病机制。 一、基因诊断 第九节 基因诊断 (一) 基因诊断的基本方法 1、DNA分子杂交 通过提取羊水细胞的DNA和已知序列的cDNA进行分子杂交，以测定待测基因是否缺失。 2、限制性内切酶酶谱分析法 3、限制性片段长度多态的连锁分析 4、PCR方法 5、寡核苷酸探针法 人工合成已知基因内部突变位点与监测基因互补的寡核苷酸，放射性同位素标记后，制成探针； 与被消化的DNA片段杂交； 放射自显影处理，确诊某遗传病是否存在。 (二) 基因芯片 1、基因芯片简介 基因芯片(gene chip)：又称DNA微点阵，是指固定