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应用简报 原材料与培养基分析 分离 15 种未衍生化的多糖和唾液酸 USP 标准品 使用 Agilent AdvanceBio MS Spent Media 色谱柱与 TOF MS 检测 作者 摘要 Richard Hurteau 多糖和唾液酸是生物处理器中所用培养基的常见组分，需要在治疗性蛋白质（如单 安捷伦科技有限公司 克隆抗体）的生产过程中对其进行监测。本应用简报使用采用 HILIC 技术的 Agilent Wilmington, DE, USA AdvanceBio MS Spent Media 色谱柱分离所用培养基中这些典型组分的 USP 标准 品。使用 Agilent 6230 飞行时间 (TOF) LC/MS 分析上述化合物，无需昂贵且耗时的 衍生化步骤。 前言 实验部分 多糖和唾液酸在单克隆抗体 (mAb) 产品 材料与方法 和其他治疗性蛋白质的生产中具有关键 1,2,3 样品 作用 。传统 HPLC 碳水化合物分离包 括 SEC 或阳离子配体交换糖分析柱。它 USP 标准品 USP 目录号 半乳糖 (200 mg) 1287700 们需要加热到较高温度并与示差折光 (RI) KDN (100 mg) （3-脱氧-D-甘油-D-半乳糖-2-尤罗索尼克酸） 1354852 检测器配合使用，因为碳水化合物缺少进 一水合乳糖 (500 mg) 1356701 行紫外检测所需的发色团。在分离碳水 乳果糖 (1 g) 1356803 化合物混合物时 RI 检测器具有局限性， 一水合麦芽糖 (500 mg) 1375025 因为它们与梯度方法不兼容。蒸发光散 甘露胺盐酸盐 (300 mg) 1375160 射检测器 (ELSD) 也可用于碳水化合物分 甘露糖 (500 mg) 1375182 析，但也存在某些限制4 。电喷雾电离质 N-乙酰神经氨酸 (200 mg) 1612619 N-羟乙酰神经氨酸 (200 mg) 1294284 谱 (ESI-MS) 比 RI 或 ELSD 检测灵敏度 蔗糖 (100 mg) 1623637 更高5。衍生化步骤也用于碳水化合物的 塔格糖 (200 mg) 1642904 LC/MS 和 GC/MS 分析，但耗时费力。