微生物学通报一株光合细菌的分离鉴定及该菌对氨氮和亚.pdfVIP

微生物学通报 Oct. 20, 2019, 46(10): 2512−2528 Microbiology China DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180847 tongbao@ /wswxtbcn 研究报告 一株光合细菌的分离鉴定及该菌对氨氮和亚硝态氮的去除 作用 王艺雅 张其中* 暨南大学水生生物研究所 广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实验室 广东 广州 510632 摘 要：【背景】中国是水产养殖大国，氨氮、亚硝态氮是水体中主要的氮源污染物。水体氨氮超标 不仅会损伤水生动物的神经系统和肝肾系统，还会导致体表及内脏充血。亚硝态氮过高会阻碍血液 运载氧气能力，导致鱼虾缺氧、免疫力下降，从而引发肠炎、烂鳃，甚至窒息死亡。部分光合细菌 有去除水体氨氮、亚硝态氮的能力，且对环境友好无二次污染。【目的】从广东养殖水体分离、纯化、 筛选出生物活性好的光合细菌(编号 SP3)进行种属鉴定，优化培养条件，检测其去除水体氨氮和亚硝 态氮的能力，为养殖水体去除氨氮和亚硝态氮提供目标菌株。【方法】用双层平板法从混合菌液中分 离得到光合细菌，通过革兰氏染色、碳源利用试验、对无机电子供体的利用试验以及 16S rRNA 基 因序列分析对目标菌株进行种属鉴定；测定菌株 SP3 在不同 pH 、不同浓度 NaCl 条件下的 OD600 ， 优化培养条件；通过测定 7 d 内 SP3 菌株在不同浓度氨氮(氯化铵配制)和亚硝态氮(亚硝酸钠配制) 中 OD600 的变化趋势，确定该菌株对不同氮源的利用情况；用纳氏比色法、分光光度法测定 SP3 菌 株降解水体氨氮和亚硝态氮的能力。Genome walking 扩增获得亚硝酸盐还原酶基因(nirS) ，通过荧光 定量 PCR 研究 nirS 在氨氮、亚硝态氮去除过程中的表达动态。【结果】筛选出的菌株 SP3 为革兰氏 阴性菌，短杆状；能以醋酸盐、丙酮酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、苹果 酸、果糖、葡萄糖作为碳源，不能以乙醇和丙酮作为碳源；能利用硫化钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠 作为无机电子供体； 16S rRNA 基因序列分析表明其与沙氏外硫红螺菌 (Ectothiorhodospira shaposhnikovii)序列相似度为 99%；菌株 SP3 适宜 pH 为 6.0−8.5 ，适宜盐度为 0−3%；菌株 SP3 以铵盐作为氮源时生长状态明显优于亚硝酸盐；以初始菌液浓度 8.6×109 CFU/mL 、起始氨氮量 84.15±0.58 mg/L 的条件培养7 d ，水体氨氮累计去除量为 79.45±0.29 mg/L ，氨氮累计去除率达到 94.42%； 在同样菌浓度和 2 mg/L 亚硝酸钠的条件下培养 5 d ，水体亚硝态氮含量低于检测限 0.003 mg/L 。 在菌株 SP3 去除氨氮、亚硝态氮过程中 nirS 相对表达量上调。【结论】菌株 SP3 为沙氏外硫红螺菌 (E . shaposhnikovii) ，能有效去除水中氨氮和亚硝态氮，具有净化水质作用，在水产养殖和污水处理 中有广阔应用前景。 关键词：光合细菌，分离鉴定，培养条件优化，氨氮去除，亚硝态氮去除 Foundation item: Industry-University Research Project of Guangdong Province (2016B090918029) *Corresponding author: E-mail: zhangqzdr@126.com Received: 30-10-2018; Accepted: 14-03-2019; Published online: 23-04-2019 基金项目：广东省产学研项目(2016B090918029) *通信作者：E-mail ：zhangqzdr@126.com 收稿日期：2018-10-30 ；接受日期：2019-03-14 ；网络首发日期：2019-04-23 王艺雅等: 一株光合细菌的分离鉴定及该菌对氨氮和亚硝态氮的去除作用