成熟树突状细胞在肝脏缺血再灌注中的作用.pdfVIP

第38卷第4期 南京医科大学学报（自然科学版） 2018年4月 ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING（NaturalScience） ·453 · 成熟树突状细胞在肝脏缺血再灌注中的作用 李 智，郑 磊，凌 威，朱德明，孔连宝* 南京医科大学第一附属医院肝移植中心，江苏 南京 210029 ［摘 要］ 目的：探讨成熟树突状细胞（dendriticcells，DCs）在小鼠肝脏缺血再灌注中的作用。方法：收集骨髓源性树突状细 胞（bonemarrowdendriticcells，BMDCs），经过不同处理（正常肝细胞培养上清或缺氧再氧合原代肝细胞培养上清培养24h）后， 在细胞流式仪上检测细胞成熟相关指标（CD40、CD80、CD86、MHCⅡ）；然后将20只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成缺血再灌 注组（IR）、未经刺激的骨髓源性树突状细胞处理组（IR+NEG⁃BMDCs）、正常肝细胞上清刺激的骨髓源性树突状细胞处理组 （IR+CON⁃BMDCs）、经缺氧再氧合的原代肝细胞上清刺激成熟骨髓源性树突状细胞处理组（IR+H/R⁃BMDCs），各组5只。采用 70%肝脏缺血再灌注模型（缺血1h，再灌注6h）。各组分别于术前1h给予PBS、NEG⁃BMDCs、CON⁃BMDCs、H/R⁃BMDCs尾静 脉注射。酶联免疫吸附实验（ELISA法）分别测定血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、白介素⁃10 （IL⁃10）、白介素⁃17（IL⁃17）水平。通过光镜观察组织HE染色改变。反转录酶⁃聚合酶链式反应（RT⁃PCR）检测肝组织转化生 长因子β（TGF⁃β）、叉头框蛋白P3（FOXP3）、IL⁃10、IL⁃17水平。结果：H/R⁃BMDCs处理组肝酶水平明显低于其他3组（P 0.05），形态学分析及Suzuki评分明显优于其他3组。H/R⁃BMDCs处理组血清及肝组织中IL⁃10、肝组织中TGF⁃β、FOXP3表达 水平明显高于其他组，IL⁃17低于其他组（P0.05）。结论：H/R⁃BMDCs预处理可以通过调节调节性T细胞（Treg）和辅助性T细 胞17（Th17）的平衡来减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤。 ［关键词］ 肝脏；缺血再灌注；树突状细胞；调节性T细胞；辅助性T细胞17 ［中图分类号］ R364.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2018）04⁃453⁃05 doi：10.7655/NYDXBN Effectsofmaturedendriticcellsonmouseliverischemia/reperfusioninjury LiZhi，ZhengLei，LingWei，ZhuDeming，KongLianbao* LiverTransplantationCenter，theFirstAffiliatedHospitalofNMU，Nanjing210029，China ［Abstract］ Objective：Toinvestigate effectsofmature dendriticcells（DCs）onmouseliverischemia/reperfusion （I/R）injury. Methods：Afterdifferenttreatmentofbonemarrow⁃deriveddendriticcellscollected，stainingwasperformedaccordingtothereagent protocol，andtherelevantindexesweredetectedonthecellflowmeter（CD40，CD80，CD86，andMHCⅡ）.Atotalof20healthymale C57BL/6micewererandomlydividedintofourmainexperimentalgroups（n=5each），includingtheischemia/reperfusion（I/R）group， theNEG⁃BMDCspretreatmentgroup，the CON⁃BMDCspretreatmentgroup，andtheH/R⁃BMDCspretreatmentgroup.Wechosea nonfatalmodelof70%liverI/R（treatedwith 1his