微生物学通报大肠杆菌K99噬菌体的分离鉴定及在小鼠上.pdf

微生物学通报 May 20, 2018, 45(5): 1082−1089 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170554 研究报告 大肠杆菌K99 噬菌体的分离鉴定及在小鼠上的防治效果 1* 1 1 1 1 1 2 赵影 刘秀侠 李金敏 徐海燕 谷魏 刘元香 陈梅楠 (1. 271000) (2. 271000) 摘 要：【背景】产肠毒素大肠杆菌K99 是引起仔猪腹泻的主要致病菌之一，目前对该病的治疗主 要依赖于抗生素，但大量抗生素的长期使用造成了病原菌耐药性的增强，亟待寻求一种新的产品 来解决这一问题。【目的】以一株产肠毒素大肠杆菌K99 为宿主菌，从畜禽粪水中分离噬菌体并对 其基本生物学特性进行研究，同时在小鼠上检验噬菌体对小鼠大肠杆菌感染的防治效果。【方法】 双层平板法分离筛选烈性噬菌体并观察噬菌斑形态；纯化后进行电镜观察、核酸类型鉴定；测定 噬菌体热稳定性、pH 稳定性、最佳感染复数及一步生长曲线；通过小鼠体内实验检测噬菌体对小 鼠大肠杆菌感染的防治效果。【结果】从畜禽粪水中分离出1 株产肠毒素大肠杆菌K99 强裂解性噬 菌体，命名为 ФK99-1 ，经电镜观察及核酸类型鉴定，应属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)。噬菌体 能耐受50 °C 左右的高温，在pH 3.0−10.0 范围内效价稳定。最佳感染复数为0.000 01 ，暴发量为 108 333 PFU/cell；运用噬菌体ФK99-1 预防和治疗小鼠产肠毒素大肠杆菌K99 感染，结果显示小 鼠发病症状较阳性对照组明显减轻，小鼠血液内大肠杆菌K99 含量也显著低于阳性对照组，通过 病理切片观察显示脏器发病情况也较阳性对照组减轻。【结论】ФK99-1 是一株在不同温度、不同 酸碱性环境中有较强适应能力，且在小鼠大肠杆菌感染上表现出良好防治效果的裂解性肌尾科大 肠杆菌噬菌体。 关键词：产肠毒素大肠杆菌K99 ，裂解性噬菌体，生物学特性，防治效果 Isolation and identification of a phage against Enterotoxigenic Escherichia coli K99 and its function verification in mice ZHAO Ying1* LIU Xiu-Xia 1 LI Jin-Min1 XU Hai-Yan 1 GU Wei 1 LIU Yuan-Xiang1 CHEN Mei-Nan2 (1. Shandong Baolai-Leelai Bioengineering Co. Ltd., Tai’an, Shandong 271000, China) (2. Tai’an City Plant Protection Station of Shandong Province, Tai’an, Shandong 271000, China) Abstract: [Background] Enterotoxigenic Escherichia coli K99 is one of the main pathogens causing diarrhea in piglets. So far the treatment of this disease mainly depends on antibiotics, but the long-term Foundation item: National High Technology Research and Devel