抗孔雀石绿单链抗体.pdf

※生物工程 食品科学 2016, Vol.37, No.17 121 抗孔雀石绿单链抗体-碱性磷酸酶融合 表达和活性鉴定 * 伍伟健，董洁娴，饶美芳，詹屋强，王 弘 ，孙远明 （广东省食品质量安全重点实验室，华南农业大学食品学院，广东广州 510642 ） 摘  要： malachite green MG VL VH 采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿（ ， ）单克隆细胞的轻链 和重链 用连接肽 (Gly Ser) single chain variable fragment scFv 4 3连接，形成单链抗体（ ， ）基因，并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶 alkaline phosphatase PhoA plip6/GN plip6/GN-MG-scFv （ ， ）基因的载体 中，成功构建重组质粒 。随后重组质粒转入 BL21 - Western blotting 大肠杆菌 ，经诱导表达后，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和 鉴定结果表明所获得的融 scFv-PhoA 72 kD scFv MG PhoA 合蛋白 大小约 。利用 与 特异性结合的活性和 催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制，经过 直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL 。本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短， MG 这为进一步进行 免疫法快速检测提供了参考。 关键词：孔雀石绿；单链抗体；碱性磷酸酶；融合表达；直接竞争酶联免疫吸附法 Fusion Expression and Characterization of Single Chain Antibody against Malachite Green-Alkaline Phosphatase * WU Weijian, DONG Jiexian, RAO Meifang, ZHAN Wuqiang, WANG Hong , SUN Yuanming (College of Food Science, South China Agricultural University, Guangdong Provincial Key Laboratory of Food Quality and Safety, Guangzhou 510642, China) Abstract: The variable light and heavy chain genes from