血培养及骨髓培养操作规程.docVIP

1、操作规程 HY-021-XJ-001 血液及骨髓细菌鉴定 操作规程文件号： HY-021-XJ-001 发布日期： 2005 年 8 月 7 日 版本： B1 版 编写：王磊 共：2 页 审核：李茹平 更新发布日期： 审批：张久德 1、 检验目的： 血液及骨髓标本的鉴定 2、 标本的接种 : 2.1 培养基 2.1.1 血培养基中都必须添加 SPS。 2.1.2 双相培养基，即在培养瓶内有琼脂层于肉汤垂直（有商品供应） 。 2.2 取血量：采血量一般以肉汤培养基的 1/10 为宜。 2.2.1 急性败血症，脑膜炎，骨髓炎，关节炎，急性未处理的细菌性肺炎、肾盂肾炎。应该在治疗前 从不同部位采血分别接种于需氧，厌氧血培养瓶内。 2.2.2 可疑为心内膜炎，体温不太高的持续菌血症。 2.2.2.1 急性病例：治疗前在 1～2H 内在 3 个不同部位取 3 份标本。 2.2.2.2 亚急性病例 : 第 1 天取 3 个标本， 24H 后，若全阴性再取 3 个标本。 2.2.2.3 若已用抗生素的心内膜炎患者，连续 3 天每天取 2 个标本。 2.3 已用抗生素治疗的其他患者：在 48H内取 6 个血标本，每次在使用抗生素前采集标本 3、检验步骤： 3.1 严格无菌技术取血液注入血培养瓶后立即送实验室， 放 35℃孵育 7 天， 送实验室之前， 不可放冰 箱暂存。 3.2 下面几种情况提示细菌生长。 （1）琼脂层有细菌生长。 （2）均匀混浊，发酵葡萄糖产生气泡。 （3）微混浊有绿色变化。 （4）血球层上面出现颗粒状或絮状沉淀物生长，或自下而上的严重溶血。 （5）混浊并有胶冻状凝固，瓶壁有颗粒状粘附。 （6）表面有菌膜、菌环状生长，下层混浊。 3.3 肉眼见有细菌生长，做如下处理： （1） 取生长物涂片，做革兰染色。 （2） 取生长物做药敏试验。 （3） 取生长物做相应的生化鉴定。 （4） 取生长物移种血瓶板、巧克力和中国蓝 / 麦康凯 / 伊红美蓝等平板或厌氧平板， 2、操作规程 HY-021-XJ-001 进行分离以获得纯培养。 （5） 革兰染色所见结果应急时报告临床医生。 （6） 涂片结果证实为一种细菌生长，则可直接以增菌液做鉴定试验。如有二种或多 种细菌同时生长，则必须经过分离培养，以获得纯菌后再鉴定。 （7） 无细菌生长表现的培养瓶，在观察的 7 天中，最少在 2 次盲目传种。需氧菌培 养瓶用血琼脂平板、伊红美兰蓝或麦康凯、中国蓝及巧克力，分别于增菌培养次日和第 7 日各作 1 次 盲目分离培养。 4 、结果报告： 血培养的结果应及时通知临床医师。 （1）疑有细菌生长者，经涂片、革兰染色、镜检后，电话通知主管医师。 （2）此后约 6－8h（下午），应报药敏试验的初步结果。电话通知主管医师，通报敏感的抗生素。 （3）任何时候平板上长出单个菌落，立即完成鉴定及标准化的药敏试验，发出报告。 （4）培养 3 天仍为阴性的标本，应通知临床医师，以便作相应处理。 （5）培养 7 天仍为阴性者，报告无菌生长。 （6）临床诊断为亚急性细菌性心内膜炎者，可持续培养至 2 周再发阴性报告。 血培养中常见的病原菌 革兰阳性菌 革兰阴性菌 金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈瑟菌 表皮葡萄球菌 伤寒及副伤寒 A 群 、B 群链球菌 大肠埃希菌 草绿色链球菌 肺炎克雷伯菌 肺炎链球菌 肠杆菌属菌种 肠球菌 沙雷菌 铜绿假单胞菌 不动杆菌 流感嗜血杆菌 5、参考文献 ：全国临床检验操作常规（第三版）卫生部医政司