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微生物个体大小测定 一、目的要求： 学习测微技术：测量微生物的大小。 二、基本原理： 微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微尺两部分。 1、目镜测微尺： 目镜测微尺是一块可以放入接目镜内的特定圆形玻璃片。玻片中央是一个细长带刻度的尺，等分成50或100小格，每个等分线间距为0.1mm，测量时将其放在接目镜隔板上。因此，目镜测微尺只是测量显微镜放大后的物像。由于不同显微镜的放大倍数不同，故目镜测微尺每格实际代表长度随显微镜的不同而不同。因此在使用前必须用物镜测微尺校正，以求得在一定接物镜及目镜等光学系统下，目镜测微尺每格所代表的实际长度。 2、物镜测微尺: 物镜测微尺是一块中央部分刻有精确等分线的载玻片。每一刻度间距为10um即把1mm等分为100格，是专门为校正目镜测微尺实际数值用的。 三、材料与仪器 1、啤酒酵母 2、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺 3、无菌水、美兰染色液 四、方法与步骤 1、目镜测微尺的校正 1）将目镜测微尺装入目境内，刻度朝下，并将物镜测微尺朝上置载物台上。 2）用低倍镜核对，至能清晰看到物镜测微尺。 3）改用高倍镜或油镜对焦后，转动目镜，使目镜测微的刻度和物镜测微尺刻度平行。 4)两尺吻合后，先使两尺的一端某一刻度完全重合，然后再寻找另一端第二条重叠的刻度。 5)计下两吻合刻度间，目镜测微尺与物镜测微尺的格数。按下列公式算出目镜测微尺每小格所代表长度。 目镜测微尺每格长度（微米） 两吻合刻度间物镜测微尺格数×10μm = 两吻和刻度间目镜测微尺格数 例如：目镜测微尺的5格等于物镜测微尺的2格，则目镜测微尺1格=（2×10）/5=4微米 目镜测微尺安装方法 镜台测微尺校准目镜测微尺时的情况 2、微生物大小测定： 1）在载玻片上滴上美兰染色液，按无均操作，挑取啤酒酵母均匀地涂片，然后盖上盖玻片。 2)将“水浸片”标本置于载物台上，先用低倍镜观察到目标后，转换高倍镜测量酵母的大小，杆菌要测长度与宽度，球菌测直径，一般在测微生物细胞大小时，通常测量10—20个菌体，求出其平均值。 (3)测量结果记录： 在高倍镜下： 目镜测微尺——格=物镜测微尺——格 目镜测微尺1格= 微米 酵母细胞长度=目镜测微尺平均——格 = ——微米 宽度=目镜测微尺平均——格 = ——微米 注：要求测量10个酵母细胞的平均值 五、思考题 1、目镜测微尺为何要校正？如何进行？ 2、为何当目镜不变，目镜测微尺也不变，而改变物镜、目镜测微尺所测定的物体长度不同？ 值日安排： 20号以后的做值日，包括洗培养皿，擦桌面， 扫地面。处理载玻片和盖玻片。 * 目镜测微尺 目镜测微尺 一 镜台测微尺及其中央部分的放大 *