三章节蛋白质教材课程.pptVIP

第三章 蛋 白 质;第三章 蛋白质(protein) 　　　;第三章 蛋白质(protein) 　　(123-317页 第3，4，5，6，7章);第一节 　氨基酸—蛋白质的构件分子; 特殊氨基酸的总结 唯一一个无手性碳、无旋光性的氨基酸 ：Gly 唯一一个亚氨基酸、与茚三酮反应生成黄色物质的氨基酸：Pro 含有巯基，在空气中易氧化生成二硫键的氨基酸：Cys 在生物合成中是一种重要甲基供体的氨基酸：Met 在大多数酶的活性中心都发现有其残基的氨基酸：Ser 在生理pH条件下唯一具有缓冲能力的氨基酸：His 碱性最强、在生理条件下完全质子化的氨基酸：Arg 含有两个手性碳的氨基酸：Thr Ile 在近紫外区有吸收的氨基酸：Trp Tyr Phe 能够发生Millon反应的氨基酸：Trp 能够发生Pauly反应的氨基酸：His 能够发生坂口反应的氨基酸： Arg;（三）氨基酸的酸碱化学 aa在晶体或水中以兼性离子形式存在 等电点：在溶液某一特定pH值时，氨基酸主要以两性离子形式存在，净电荷为零，在电场中不向电场的正极或负极移动，这时的溶液pH值称为该氨基酸的等电点。 当溶液pH低于该氨基酸等电点时，氨基酸净电荷为正，反之为负。 氨基酸在等电点时溶解度最低．不同氨基酸等电点不同． 应用 根据氨基酸的电荷不同（电泳法,离子交换层析）分离混合物。 根据氨基酸的等电点不同（调节溶液pH ）分离混合物。 Handerson-Hasselbalch公式 pH = pKa + lg（[A-]/ [HA]）= pKa + lg（[碱]/[酸]） ;等电点的计算;（四）氨基酸的化学反应 1.α- 氨基参加的反应 与亚硝酸反应 与酰化试剂反应 烃基化反应 生成西佛碱的反应 脱氨基反应与转氨基反应 2,4－二硝基氟苯 （DNFB或FDNB，Sanger试剂） 苯异硫氰酸酯 （PITC， Edman试剂） 用于鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸及序列测定;2.α-氨基和α-羧基共同参加的反应 （1）与茚三酮的反应 （2）氨基酸的两性解离 （3）形成肽键 （4）离子交换反应 茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸共热，所有具有游离氨基氨基酸都生成紫色化合物（?570）。 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应直接生成的是黄色化合物（?440）。 应用：是一个检测和定量氨基酸和蛋白质的重要反应。 用层析法把各种氨基酸分开后，利用茚三酮显色可以定性测定各种氨基酸。 ;3.侧链R基参加的反应 (1)酪氨酸的酚基　　　 米伦反应（Millon) 　与HgNO3、Hg（NO3)2、HNO3作用呈红色；与浓硝酸作用生成黄色。 Pauly反应 　与重氮化合物反应生成橘黄色化合物。 　注： His的咪唑基与重氮化合物反应生成棕红色 （2）精氨酸的胍基 坂口反应（Sagakuchi） 　与次氯酸钠(或次溴酸钠)及α-萘酚在氢氧化钠溶液中产生红色产物。;（3）Cys侧链上的巯基（－SH） 与卤化烷生成稳定的烷基衍生物------可保护 -SH 以防被氧化 Cys巯基打开氮丙啶的环 巯基能和各种金属离子形成络合物----SH 酶遇到重金属离子而生成硫醇盐时，将导致酶失活 巯基易受空气或其他氧化剂氧化－两种氧化衍生物 形成二硫化物：胱氨酸的形成 形成磺酸基：对游离的巯基具有保护作用，保护Cly巯基之间的氧化。 ;二硫键的还原（打开） ①氧化剂：过甲酸（HCOOOH） ②还原剂：巯基乙醇、巯基乙酸、二硫苏糖醇等。;　;（六）氨基酸混合物的分离和分析 分配层析法的一般原理 纸层析 柱层析 离子交换层析 气液层析 薄层层析 高效(压)液相层析HPLC ;二、蛋白质通论与结构;（三）肽 一分子氨基酸的α-羧基与另一分子氨基酸α-氨基脱水缩合的化合物叫做肽．肽是氨基酸的线性聚合物。 肽键的特点 具有部分双键特性，不能自由旋转,呈现相对的刚性和平面化。 肽键的亚氨基没有明显的解离和质子化。 除脯氨酸外多以反式结构存在。 肽的化学反应 多肽链的水解：酸水解、碱水解、酶水解 具有旋光性 颜色反应 紫外吸收 天然存在的重要多肽 以蛋白质形式存在: 以天然活性肽形式存在： 生物活性肽 ;（四）一级结构 一级结构：指蛋白质分子中氨基酸的组成、排列顺序、连接方式以及多肽链的数目和关联。（主要为肽键，包括二硫键） 是蛋白质空间结构和生理功能的基础。 蛋白质一级结构的测定 要求 样品必须是均一的。纯度在　97% 以上 知道蛋白质的分子量 步骤（待测样品分成多份分别进行各步骤测定） 测定蛋白质分子中多肽链的数目 拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键 分析每一多肽链的氨基酸组成 测定并确定多肽链的氨基酸序列 确定原多肽链中二硫键的位置 ;（五） 蛋白质的构象 蛋白质的构象指